柑橘溃疡病生防菌株cqbs03鉴定和其培养特性研究

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1、8期陈力等：柑橘溃疡病生防菌株CQBS03的鉴定及其培养特性研究2545柑橘溃疡病生防菌株CQBS03的鉴定及其培养特性研究陈力，王中康，黄冠军，曹月青，夏玉先，殷幼平（重庆大学生物工程学院基因工程研究中心，重庆市基因功能及调控技术重点实验室，重庆400030）摘要：【目的】筛选鉴定柑橘溃疡病菌拮抗菌，研究其培养特性及拮抗物质的初步性质，为柑橘溃疡病的生物制剂研制奠定基础。【方法】利用对峙培养法筛选对柑橘溃疡病菌具有良好抑制作用的生防菌，并通过对菌株形态、生理生化特征以及16SrDNA序列分析鉴定其分类地位；以单因素试验和正交设计方法对影响CQ

2、BS03菌株抑菌活性物质产生的各种培养条件进行优化；利用硫酸铵沉淀获得抑菌物质粗提物并测定其对温度、蛋白酶及氯仿的敏感性。【结果】经鉴定CQBS03为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis。CQBS03抑菌活性成分主要存在于培养液中，能被80%饱和度硫酸铵沉淀，最高可耐受的温度范围为60～70℃；活性成分在280nm处有最大吸收峰，分子量大于10kD，对蛋白酶K和胰蛋白酶稳定，而对氯仿部分敏感。培养特性研究表明，CQBS03最适培养基为YPG液体培养基，抑菌物质产生的最适培养条件为：pH8.0左右，28℃培养72h。【结论】枯草芽孢杆菌C

3、QBS03所产生的抑菌物质主要成分是蛋白质，且属于外泌型蛋白；该抑菌蛋白对多种植物病原菌有抑菌作用，尤其对柑橘溃疡病菌抑菌活性高，稳定性好，是一株极具开发潜力的生防菌株。关键词：枯草芽孢杆菌；拮抗细菌；生物防治；柑橘溃疡病；抑菌蛋白EvaluationofBacillussubtilisStrainCQBS03AgainstXanthomonasaxonopodispv.citriCHENLi,WANGZhong-kang,HUANGGuan-jun,CAOYue-qing,XIAYu-xian,YINYou-ping(TheKeyLabora

4、toryofGeneFunctionandRegulationofChongqingMunicipalEducationCommission,TheBioengineeringCollegeofChongqingUniversity,Chongqing400030)Abstract:【Objective】CitrusbacterialcankercausedbyXanthomonasaxonopodispv.citri(Xac.)isoneofthemostimportantplantdiseases.Theaimsoftheexperimen

5、tareatscreeninghigheractivitiesantibacterialstraintocontrolthisdisease,andstudingtheantibacterialsubstancecharacteristics.【Method】ThebacterialstrainCQBS03wasisolatedfrommicroorganismfloraofcitrusleafsurface.Thestrainwasidentifiedbasedonthebacteriologicalcharacteristicsandthe

6、16SrDNAsequence.ThecultureconditionsofCQBS03strainwereoptimizedbysinglefactorandorthogonalexperiment.CrudeantibacterialsubstancewasobtainedbyammoniumsulfatefromfermentedliquidoftheCQBS03strain,andthethermalstable,optimumreactivetemperatureandpHweretested.【Result】Thestrainwas

7、identifiedasBacillussubtilis.TheantibacterialactivitysubstancefromCQBS03coulddesignateasonekindofproteinbasedonthelargemolecularweight(morethan10kD),unstableathighertemperature(60℃to70℃),partlysensitivetochloroform,stabletoproteinaseKandtrypsin.Theoptimalcultureconditionsoft

8、hebacteriafortheantibacterialproteinproducingarepH8.0,28℃inyeast peptone gl