赤铁矿除磷菌株的鉴定与培养特性研究

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1、赤铁矿除磷菌株的鉴定与培养特性研究对复筛出来的TX2,TX3两株菌株，对它们在固体培养基生长形态的观察,通过巨大菌落特征观察、染色观察和载片培养三个试验，以此来确定微生物所属的纲(类)、目、科、属。⑴菌株培养2株菌株接种于培养皿内察氏固体培养基表面,静置于30°C培养箱中充分生长。(2)实验设备及器具生物显微镜、恒温培养箱、载玻片、培养皿、盖玻片、酒精灯、接种环、滴管、玻棒等。(3)主要试剂乳酸石碳酸棉蓝染色液血：石碳酸加入10mL蒸憾水1OOmL,加热溶解,然后加入10讥相对密度为1.21的乳酸和20mL的甘油，最后加入0.02g棉蓝,等到其充

2、分溶解后倒入试剂瓶备用o其它:甘油、石蜡、无菌水等。4.1.1.1实验方法(1)巨大菌落的特征观察在无菌操作台上，将以高温蒸汽灭菌的察氏培养基融化倒入培养皿，置生化培养箱30°C培养2〜3天，确认无杂菌菌落长岀。然后，用接种环分别挑取少量TX2,TX3菌株成熟抱子在之前准备好的固体培养基表面进行点种。在30°C的培养箱中培养47天。待培养皿中的砲子生长成成熟大型的菌落后，用肉眼观察并记录菌落的特征(形状，大小，边缘结构，光泽，颜色等)。⑵微生物染色观察取载玻片，洗净，用滤纸擦拭干净。在中间滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝，小心挑取少屋菌丝，在棉蓝上摊开，加

3、盖盖玻片，尽最避免产生气泡，影响观察效果,在光学显微镜下观察先用低倍镜，后用高倍镜。(3)载片培养法观察取一套清洁干燥的培养皿，把一张完全浸润20%甘油的滤纸(合适大小)铺在培养皿底部，将两根短玻璃棒水平放置在滤纸上。取一副灭菌后冷却干燥的载玻片与盖玻片，在盖玻片上滴加一滴尚未凝固固体培养基，待冷凝后立即点种砲子，然后用盖玻片盖在上面。用融化的石蜡封闭盖玻片的四周，封好后，载玻片放在培养皿的短玻璃棒上，盖好皿盖。以上操作在无菌操作台上完成。然后，把培养皿静置于3o°c恒温培养箱中培养，不定时取出载玻片进行显微镜镜检，观察抱子发育情况。4.1.1.

4、2实验结果(1)巨大菌落观察结果菌株TX2,TX3在察氏固体培养基中的生长情况见表4・1。TX2菌株在培养皿中形成成熟菌落。菌落直径为35mm,正面大部为灰绿色,有白圈成熟以前为白色，砲子成熟后转为绿色。背面白色，略有淡黄色；菌落中间略有凸起，四周相对中心部分较薄；菌落边缘整齐，菌落质地呈粉末状，比较容易被接种环挑起，菌丝体与培养基的结合程度并不紧密。TX3菌株在培养皿中形成成熟菌落。菌落直径为57mm,中心部分稍凸起，有规则的编射状沟纹，质地丝绒状；分生泡子结构大量，表面呈暗褐黑色，有渗出液，菌落反而呈淡黄色，分生砲子头初为球形，菌落边缘有白色

5、丝状，容易被接种环挑起。(2)载片培养结果TX2镜检的结果：菌落绿色，分生范子梗从菌丝垂直生出，无足细胞，有横,顶端排列成帚状间枝，分枝多次，顶层为小梗，分生泡子串呈不分枝的链状,单个饱子注绿色，呈椭圆形，光滑，无菌核。鉴定为真菌I'KFungi)/半知菌类/丝抱纲/丝泡目/丛梗袍科/单砲亚科/青霉^(penicillium.spp)^TX3镜检的结果：菌落黄褐色，菌丝体有隔膜，菌丝褐色，砲子黄褐色，分生抱子梗从足细胞分岀，顶部略为膨大形成顶囊，分生砲子穗呈辐射状，小梗两层，分生鞄子球形。这些特征符合曲霉的典型特性，依据《真菌鉴定手册》，鉴定为真

6、菌门/半知菌亚门/丝饱纲/丝砲目/从梗泡科/曲霉属{AspergillusSpp.}^K图4-1TX2青繚菌落(正面)Fig.4-1TX2Penicilliumcolonies(positive)图42TX2青篡菌落(反面)Fig.4-1TX2Penicilliumcolonies(negative)图4・3TX3曲霉菌落（正面）Fig.4-1TX3Aspergilluscolonies(positive)图4・4TX3曲霉菌落(反面)Fig.4-1TX3Aspergilluscolonies(negative)表4-1TX2与TX3的菌落特征T

7、able4-1thecolonycharacteristicsofTX2andTX3菌株菌落特征TX2TX3生长速度较慢较快正面菌中央绿色黄褐色正面落边缘绿色/白色白色背面颜中央淡黄色白色背面色边缘白色白色菌落厚薄较薄较厚中央凹陷或凸起凸起凸起菌落边缘整齐不整齐菌落质地粗绒状粉状生长状况不限制不限制挑起程度容易容易菌落直径（7d）35mm53mm4.1.2KX10的鉴定在显微镜下观察，可以发现KX10是一种杆状细菌，运动迅速，有鞭毛。图4-5显微镜下观察KX10图4-6KX10菌落Fig.4-5KX10underthemicroscopeFig.

8、4-6KX10colony将该菌株的鉴定工作委托中科院昆明动物所完成，通过16SrRNA基因序列检测，在GenBank中基因序列相似度最