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1、乳酸杆菌对黄曲霉生长抑制的研究_唐雨蕊中国饲料2008年第5期黄曲霉作为一种常见的病原菌,不仅污染食品和饲料,并可引发人类和动物多种疾病。黄曲霉的次级代谢产物黄曲霉毒素(aflatoxins,AFTS)具有很强的毒性,被认为有致癌性、致突变、致畸性、抑制免疫力,并可引起肝部损伤等危害。目前,多采用物理或化学的方法解决黄曲霉对食品和饲料的污染问题,但这些方法不仅不能完全除去毒素,反而会降低食品和饲料的营养价值。近年的研究表明,某些乳酸杆菌可抑制霉菌的生长和产毒(张柏林等,2005)。Gourama和Bullerman
2、(1995)发现,嗜酸乳酸杆菌、保加利亚乳酸杆菌和植物乳酸杆菌可抑制寄生曲霉的孢子萌发。本试验从健康动物体内分离抗黄曲霉活性的乳杆菌,不仅能添加在饲料中,起到生物防霉的作用,并且能在动物体内定植,为进一步研究开发饲料生物防霉剂提供菌种资源。1材料与方法1.1材料黄曲霉菌SA0206(由四川农业大学植物病理实验室提供);鸡源乳酸杆菌1株(由四川农业大学动物微生态实验室提供);MRS培养基、PDA培养基、糖发酵培养基和生化鉴定培养基,参照凌代文和东秀珠(1999)、东秀珠和蔡妙英(2001)方法配制。1.2试验方法1.
3、2.1乳酸杆菌分离培养取健康奶牛的新鲜粪样,称取0.5g加入装有49.5mL灭菌生理盐水的三角瓶中,混匀后进行10倍递增稀释到10-6。取10-4、10-5、10-6稀释度的混悬液分别划线到MRS固体培养基上,于37℃培养36～48h,根据菌落特征挑取似乳酸杆菌的菌落涂片镜检,选择G+杆菌划线于MRS固体培养基上,进一步纯化培养后,于4℃冰箱保存备用。1.2.2乳酸杆菌属的鉴定通过过氧化氢酶,硝酸盐还原,明胶液化和硫化氢试验的结果来确定并筛选出乳酸杆菌属的菌种(东秀珠和蔡妙英,2001)。1.2.3孢子悬液的制备将
4、霉菌接种在PDA斜乳酸杆菌对黄曲霉生长抑制的研究四川农业大学动物医学院微生态研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室[摘要]从7株分离自健康奶牛粪样的乳酸杆菌及鸡源乳酸杆菌B30中筛选对黄曲霉生长有明显抑制作用乳酸杆菌,采用混悬涂布法测试这几株乳酸杆菌对黄曲霉孢子萌发的影响。结果显示,鸡源乳酸杆菌B30和牛源乳酸杆菌BN3均能较明显的抑制黄曲霉生长,并且对黄曲霉的孢子萌发有抑制作用。通过生化鉴定和16SrRNA序列分析,鉴定两菌株均为植物乳酸杆菌。[关键词]乳酸杆菌;黄曲霉;抑制;鉴定[中图分类号]S816.3[
5、文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2008)05-0042-04[Abstract]SevenstrainsofLactobacillusisolatedandidentifiedfromthefreshexcrementsofhealthycows,andLac-tobacillusB30isolatedfromchickenwereselectedfordetectingtheantifungalactivitytoAspergillusflavusonthegrowthandtheviabilit
6、yofsporesthroughspreadplatemethod.Accordingtotheresultsoftraditionalidentificationand16SrRNAgenesequencing,LactobacillusB30andBN3wereidentifiedasLactobacillusplantarum.[Keywords]Lactobacillus;Aspergillusflavus;inhibition;identification唐雨蕊倪学勤*曾东基金项目:教育部长江学者和创新团
7、队发展计划(IRT0555)*通讯作者资源开发利用422008年第5期中国饲料面,28℃培养10d后,加入一定量的无菌磷酸盐缓冲液[含0.05%(V/V)的吐温80],用接种针挑取斜面上的孢子到缓冲液中,然后将含有霉菌孢子的磷酸盐溶液通过无菌纱布过滤以除去菌丝残体。用无菌磷酸盐缓冲液将孢子浓度调整为105cfu/mL和107cfu/mL,待用。1.2.4乳酸杆菌培养液的制备将保存的乳酸杆菌接种到新鲜的MRS液体培养基中,37℃厌氧培养24h,再以1%(V/V)的量接种到新鲜的MRS液体培养基中,37℃厌氧培养24h
8、。在显微镜下,用血细胞计数板计数,将细胞浓度调整为1×109cfu/mL,同时测定培养液pH值。1.2.5抑制霉菌生长试验分别用乳酸杆菌的全菌液或离心上清液(3000r/min,20min)1mL涂布PDA培养基,待液体完全吸收后,在培养基的中心接种20μL黄曲霉孢子悬液(1×107cfu/mL),同时设未涂布乳酸杆菌的空白PDA培养基为对照组,接种20μL
