肉桂醛、柠檬醛抑制黄曲霉生长机制研究

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1、肉桂醛、柠檬醛抑制黄曲霉生长机制研究【摘要】目的研究中药活性成分肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉细胞膜麦角固醇生物合成的影响，以探讨其抗菌的作用机制。方法将黄曲霉接种在含有不同浓度药物的蔡氏固体培养基中，同时设不加药物为空白对照，置265℃恒温培养3d，刮取平皿上菌苔，称重、皂化，提取真菌中的难皂化脂，高效液相色谱(HPLC)法测定其中的麦角固醇含量。结果柠檬醛浓度为016μg/ml、肉桂醛浓度为009μg/ml作用黄曲霉后，麦角固醇含量较未用药组显著降低。结论肉桂醛、柠檬醛可能通过影响黄曲霉麦角固醇的生物合成抑制黄曲霉生长。【关键词】肉桂醛　　黄曲霉广泛分布于自然界，极易引起物品霉变。食品等物品

2、霉变除造成直接重大的经济损失外，某些产毒株产生的毒素，还可导致肿瘤高发，严重危害人和动物健康〔1〕。目前主要利用化学防腐剂抑制真菌的生长，化学防腐剂种类繁多，广泛应用于食品方面的有山梨酸、苯甲酸、丙酸及其盐类以及纳它霉素等，但这些防腐剂防霉效果不是很理想，而且对人和动物多有潜在的毒性。中药活性成分肉桂醛、柠檬醛作为食品防腐剂已应用于食品工业，但对其抗菌机制研究较少。本研究室实验表明，中药活性成分肉桂醛、柠檬醛有良好的抗黄曲霉作用〔2-5〕。本文用高效液相色谱(HPLC)法测定了肉桂醛、柠檬醛作用黄曲霉后真菌细胞膜麦角固醇含量的变化，以期探讨抗真菌的作用机制，旨在为开发新型的食品天然防腐剂提供理

3、论依据。　　1材料与方法　　11实验菌株黄曲霉菌为标准株(CCCCMIDA2)［中国医学真菌中心(南京)］。　　12仪器与试剂yknm高效液相色谱仪(美国Gilching公司)；真菌培养箱；紫外分光光度计等。肉桂醛(中国上海双喜香料制剂厂)，比重1047～1051(批号：20020401，纯度＞95％)；柠檬醛(德国BerlinrangVnitdenAugendeHautvermiden公司)批号：002489S20085632，纯度98%。，比重0887～0889(批号：002489S20085632，纯度＞98％)；酮康唑(纯度：200mg/片，批号：030418108，西安

4、杨森制药有限公司)，临用前将酮康唑研成细粉并溶于二甲基亚砜，使其浓度为40mg/ml；麦角甾醇(美国Sigma公司)，用环己烷配成10mg/ml，-20℃保存；乙腈为色谱纯；皂化剂：新鲜配制的含15%NaOH的90%乙醇溶液；蔡氏培养液〔6〕；其他试剂均为分析纯。　　13方法　　131菌液制备将试验菌株接种于蔡氏斜面，26℃培养至快速生长早期，活化2次，此时菌苔覆盖斜面，加入蔡氏液体，吸管吹打菌苔使孢子游离于培养液中，用500目无菌尼龙网过滤，滤液经血细胞计数板计数及紫外分光光度计测定，调整孢子浓度为106个/ml。　　132不同浓度药液的制备参照　　14统计分析采用SPSS11

5、0软件进行分析。　　2结果　　21标准品麦角甾醇的出峰时间按本实验建立的色谱条件进样。结果显示，麦角甾醇的出峰时间在16～17min。　　22标准曲线麦角甾醇含量在05～001625mg/ml范围内的线性回归方程为：y=4743636x+0507256(n=6,r=0999427)，麦角甾醇含量在此范围内与峰面积有很好的线性关系。　　23麦角固醇的精密度测定测定日内及日间相对标准差，其RSD(相对标准差)分别在012%～144%，10%～202%。说明测定结果的重现性好，见表1。　　24肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉细胞膜麦角甾醇含量的影响以酮康唑为阳性对照，测定了肉桂醛、

6、柠檬醛作用黄曲霉后麦角甾醇含量的变化。柠檬醛较高浓度016μg/ml、肉桂醛009μg/ml作用黄曲霉后，麦角固醇含量较相应未用药组减低，差异有统计学意义(P＜001)，见表2。　　表1麦角固醇的精密度测定（略）　　表2用药前后黄曲霉麦角固醇含量比较（略）　　注：与相应对照组比较，*P＜005，**P＜001　　3讨论　　肉桂醛、柠檬醛是肉桂、山苍子油的主要成分，且两者已分别用于化工、食品、粮食防腐、医疗卫生。实验表明，两者有良好的广谱抗真菌作用特别是有高效的抗曲霉作用。张文娟〔8〕、罗曼〔9〕等研究了柠檬醛致黄曲霉的形态结构和某些宏观影响。麦角甾醇是真菌细胞质膜的重要组成成分，它是

7、一种准平面体分子，通过与磷脂结合稳定磷脂相，从而增加膜的稳定性。麦角甾醇的缺乏，必将引起真菌细胞膜功能异常，甚至发生细胞破裂。目前用于检测细胞膜中麦角甾醇含量的方法有薄层层析法、高效液相色谱法等〔10〕。反向高效液相色谱分析法具有分析速度快、分离效能高、自动化程度好的特点而被广泛使用。本实验以酮康唑为阳性对照，用反相液相色谱法测定了中药活性成分肉桂醛、柠檬醛作用黄曲霉后细胞膜麦角甾醇含量的变化。实