红细胞血型血清学试验

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1、红细胞血型血清学试验安徽省合肥市第一人民医院输血科林正民江建锋陈玲梁晓浏IgG抗A（B）测定【原理】血清以巯基乙醇（2-mercaptoethanol,简称2-me）处理后，IgM抗体分子裂解为6-7S亚单位。此种亚单位虽然仍保持与抗原结合的能力，但已失去与相应红细胞凝集的作用。IgG抗体分子则不被2-me灭活，保持与相应红细胞致敏的血清学特性。IgA抗体分子可部分被灭活（7S亚单体不受影响，9S及11S多聚体被灭活）。【试剂】1、0.2mol/L2-巯基乙醇应用液取巯基乙醇1.6ml以pH7.4PBS（KH2PO41.73g,Na2HPO4·12H2O19

2、.35g,NaCl8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml，分装安瓿，每支1ml或2ml,冰箱保存备用。2、受检者血清。3、5%A型和B型红细胞PBS（或生理盐水）悬液。4、抗人球蛋白血清。【操作】1、吸取受检者血清0.4ml，加2-me应用液0.4ml，混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h。2、排列小试管（10mm×60mm）两排，每排10支，第一排每管各加pH7.4的PBS0.4ml。3、第1排第1管加2-me处理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第1管内，其余0.4ml移入第1排第2管内，混合。以此类推，作倍量稀释至第10管

3、，每管内留有1:2,1:4,…1:1024不同稀释度的血清各0.2ml。4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml，第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml，置37℃水浴温育1h。5、结果观察如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，称为“盐水效价”。6、其余红细胞未见凝集的试管，再以pH7.4PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压实红细胞。7、每管各加pH7.4的PBS2滴，混合。8、每管各取1滴，分别移至另一排小试管中，再各加最适稀释度抗人球蛋白血清1滴，混合。9、1000r/min离心1min。10、轻轻摇

4、动试管，观察结果，红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗A或抗B效价。【附注】1、本法常用于ABO血型IgG抗A或抗B效价的测定，如ABO新生儿溶血病母亲血清中IgG抗A(B)的测定。2、二硫苏糖醇（dithiothreitol,DTT）也可用于灭活IgM抗体，以测定IgG抗体。方法：0.01mol/LDDT(0.77gDTT溶于500ml等渗盐水)与等量受检者血清混合，置37℃水浴30min，再以此处理血清进行试验。DTT的优点为无恶臭味，反应快速，但对强抗体灭活效果较差。抗球蛋白试验抗球蛋白试验（antiglobulintest,AGT）又称Coomb

5、s试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法。将抗球蛋白血清（antiglobulinserum，AGS）加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白（使其致敏的不完全抗体）与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗球蛋白血清除了可以测定红细胞上的IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分（C3、C4）。所谓广谱AGS即包括抗IgG和抗C3。（一）直接抗球蛋白试验【原理】利用抗球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病（胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏）溶

6、血性输血反应（输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏）自身免疫性溶血性贫血（患者红细胞被自身抗体致敏）以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。【试剂】1、抗球蛋白血清（广谱及单价），市售合格产品。2、用不完全抗D致敏的5%Rh(D)阳性红细胞盐水悬液供阳性对照用。取3人O型红细胞，混合，经盐水洗涤后取压紧的红细胞，加等量抗D血清，置37℃水浴致敏30min,取出后离心去除上清液，以生理盐水洗涤3次，最后再用盐水配成5%红细胞悬液。3、正常人5%D阳性红细胞悬液（未致敏），供阴性对照用，除不用抗D血清外，按上法配制。【操作】1、取受检查

7、红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，配成5%红细胞盐水悬液。2、取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，移入1小试管（10mm×60mm）内，加抗球蛋白血清1滴，混匀。3、阳性对照：用不完全抗D血清致敏的5%D阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。4、阴性对照：正常人5%D阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。5、受检者以及阳性、阴性对照管同时以1000r/min离心1min，轻轻侧动，观察结果。6、结果判定如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，则受检者红细胞凝集者为阳性，不凝集者为阴性。【附注】1、标

8、本采集后立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细