婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌检验方法的比较、优化和研究

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1、廖连英，等：婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌检验方法的比较、优化和研究91婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌检验方法的比较、优化和研究廖连英罗琳郑晓冰(汕头质量计量监督检测所，汕头515041)阪崎肠杆菌是乳制品中近几年发现的一种化学试剂有限公司；致病菌，属于革兰氏阴性杆菌，适宜生长温度为万古霉素：广东环凯微生物科技有限公司；3743cI=，它能引起严重的新生儿脑膜炎，小肠结肠阪崎肠杆菌显色培养基：M160591，广东环凯微炎和茵血症，死亡率高达50％以上。目前，微生生物科技有限公司；物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的

2、污染来源，但许多病胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)：250g，广东环凯微例报告表明婴儿配方食品是目前发现的主要感染生物科技有限公司；渠道¨2]。目前，阪崎肠杆菌的检测方法主要有常规生化鉴定试剂盒：M160591，中西远大科技有限的生化检测鉴定法’、DFI法(druggan—forsythe-公司；iversen法)

3、4j、DNA环介导等恒扩增法、普通氧化酶试纸：广东环凯微生物科技有限公司；PCR法和荧光定量PCR法。其中最常见的是普通阪崎肠杆菌质控菌株：广东环凯微生物科技有生化鉴定法(GB4789．40

4、-2010)和荧光定量PCR限公司。法‘7(SN／T1632．3—2005)。笔者对这两种方法进行1．2检验程序了研究和比较，得到一种简易可行的阪崎肠杆菌检f1)GB4789．40-2010法测方法，便于各检验机构和企业掌握以加强原料和GB4789．40-2010方法流程如图1所示。产品的质量控制。对相关企业进行了调查，分析阪检样100g+BPW稀释液900mL崎肠杆菌的污染原因，以获得控制污染的监督重点，l36℃±1℃，18阪崎肠杆菌显色培养基有效降低阪崎肠杆菌的污染，确保婴幼儿群体的健I44℃

5、±0．5℃，2康与安全。I挑取蓝绿色菌落1实验部分l36℃±1℃，241．1仪器与试剂挑取黄色菌落+荧光PCR仪：StepOne型，美国ABI公司；【TSA恒温培养箱：25oC土1℃，LRH．250型(上海一I25℃±1℃，48恒科学仪器公司)，36℃±1℃，HG303—4A型(南京生化鉴定试剂盒I实验仪器厂)，44℃±0．5qC，LHS．250HC．1型(上海报告一恒科学仪器公司)；1GB4789．40-2O10法流程图恒温水浴箱：HH一60型，44oC±0．5qC，金坛市f2)SN／T1632

6、．3-2005法科兴仪器厂；SN／T1632．3-2005方法流程如图2所示。天平：JJ3000型，感量0．1g，常熟双杰测试仪器2结果比较公司；2．1检验方法比较无缓冲蛋白胨水(BPW)：广东环凯微生物科f1)GB4789．40-2010法技有限公司；①无特殊设备要求，方法经典可行；肠杆菌增菌肉汤(EE肉汤)：广东环凯微生物②阴性检样3d可出结果，阳性检样4—5d可科技有限公司；出结果；结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)：广东环凯微生物科技有限公司；通讯作者：郑晓冰，E-mail：narc

7、issus-b@163．corn改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤：研域(上海)收稿日期：2011．08．1292化学分析计量2011年，第20卷，第6期i竖±!堕垄堡ll36℃±1℃．18～22ht取10mL力口入9OmLEE肉汤136℃±1℃．18～22h阪崎肠杆菌显色培养基lII无可疑菌落Il有可疑菌落HTSAflli1℃报告未检出l氧化酶试验，革l观察黄色2h兰氏染色，生『素产生化鉴定试剂盒I一1lI报告I．．．。．．．-J图3推荐方法的流程图图2SN／Tl632l3-2005法流程肠杆菌检出率

8、高于婴幼儿奶粉。通过对检出阪崎肠③在结晶紫中性红胆盐琼脂平板上或阪崎显杆菌企业的调查分析，发现感染阪崎肠杆菌的原因色培养基上会产生假阳性菌，必须经生物鉴定方可主要是(1)生产环境的卫生管理。婴幼儿配方食品证实是阴性还是阳性结果。生产环境要求严格，企业虽然采用洁净车间进行生f2)SN／T1632．3—2005法产，但是对洁净车间空气净化系统的维护、清理和①荧光PCR检测设备一次性投人大，后续的消保养不够重视，造成空气净化系统成为污染源之一另外对生产后的管道清理不干净也是污染源之耗品成本较多，同时还涉

9、及到标准阳性菌株的管理，与更新换代，对检验人员的技术要求较高；一(如有蟑螂出没和霉变结块)。(2)操作人员的个人②一般两天可出检验结果，虽然灵敏度高，检卫生不严格，如没有严格按规定洗手、更衣、戴测周期短，但也会产生假阳性结果。对于ct值在帽，穿专用工作鞋进人生产车间。3540的检样，需经生化鉴定方可证实是阴性结果3．2建议(11生产婴幼儿配方食品的企业应定期对生产还是阳性结果。车间的环境、空气净化系统、管道进行清扫、消毒，并2．2检验结果比较严格监督生产操作人员的卫生习惯。经过对两