hplc法对医学生血清维生素a含量的测定

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1、第26卷，第3期光谱实验室Vo1．26，No．32009年5月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryMay，2009HPLC法对医学生血清维生素A含量的测定①姚进喜②张印红“张格祥“王玉“马剑华(川北医学院预防医学教研室四川省南充市涪江路234号637000)n(兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所兰州市东岗西路199号730O00)摘要建立快速提取血清中维生素A和运用HPLC测定其含量的方法。取待测血清2OL，加入无水乙醇液200~L，旋涡混合lmin。再加入正己烷溶液4

2、00pL。旋涡混合3min，离心后取上清液，用高效液相色谱仪测定。色谱条件：分析柱为Kromasil100—5C18(150×4．6mm，5／．tm)I流动相为甲醇：水(98：2，v／v)；流速为1．2rnL／min；检测波长为325nm。血清中维生紊A分离良好，浓度在2—8Og／dL范围内呈线性关系．r2=0．9992。平均回收率为98．48，151内、日间RSD均<1O％。所测医学生血清中维生素A的含量男性为(38．65士12．99)#g／dL，女性为(34．17-1-10．10)~g／dL。该法操作快速、样品处

3、理简便易行，适用于血清中维生素A的快速提取和含量的测定。关键词高效液相色谱法；维生素A；血清中图分类号：0657．72文献标识码：B文章编号：1004—8138(2009)03—0635—041前言VA是人体必需的微量营养素之一，具有维持正常视觉、影响上皮组织的形成发育和维持、增加机体免疫力、调节人体生长发育、维持神经细胞的正常功能以及防治癌症等作用r卜。VA缺乏可降低机体抗感染能力，引起呼吸道、消化道感染性疾病发生率上升，还可以引起眼部病变等疾病的发生[5]。因此，建立一种快速提取和测定血清中维生素A含量的方法具有

4、重要意义。2材料与方法2．1血样的采集、贮存对符合条件的志愿医学生，清晨空腹时由专业护士用一次性负压采血管采集肘静脉血2mL，避光静置4h后分离血清，取血清0．5mI置于塑料试管中，于一8O℃冰柜冻存待测。2．2样品预处理取待测血清200btl，加入无水乙醇液200~I，旋涡混合lmin，再加人正己烷溶液400td，旋涡混合3min，以3000r／rain离心5min，取上清液，过0．45btm滤膜，上高效液相色谱仪测定。2．3色谱条件分析柱：Kromasil100—5C18(150×4．6mm，5／~m)柱；检测波

5、长325nm；流动相：甲醇：水(98：2)；流速1．2mI／min；进样量20t~1。①中国营养学会2005年度营养科研基金(编号：05018)②联系人．手机：(O)13989183890；E—mail：yaojx05@163．corn作者简介：姚进喜(1981一)，男，甘肃省定西市入，助教，主要从事人群营养研究工作。收稿日期：2008—12—04；接受El期：2008一l2一l5光谱实验室第z6卷2．4仪器、药品及试剂HP1100型高效液相色谱仪、紫外检测器(美国惠普公司)；旋涡混合器(原上海医科大学仪器厂)；TI

6、I2C型台式冷冻离心机(军事医学科学院实验仪器厂)；维生素A标准品(美国Sigma公司)；甲醇(色谱纯)；乙醇(分析纯)；正己烷(分析纯)；实验用水为重蒸水。3结果与讨论3．1色谱图用上述色谱条件及样品处理方法得到血清色谱图(图1)。可见维生素A与血清中其他成分分离较好。l三0暑0E量．．1104t／mint／mint／minC图1维生素A色谱图色谱柱：Kromasil100—5C18(150X4．6ram，5／~m)；流动相：甲醇l水(98：2，V／V)；流速：1．2mL／min；检测波长：325nm。A——维生素

7、A标准品；B——血清；c——血清+维生素A。3．2血清校准曲线制备取维生素A标准贮备液用乙醇稀释配制不同浓度(5、lO、2O、30、40／-tg／dI)的标准系列溶液。取lmI离心试管6支，其中1支加入乙醇200／~L，其余5支分别加入不同浓度的维生素A标准系列溶液200／~I，再分别加入空白血清200~tI，旋涡混合lmin，再加人正己烷溶液400／~L，旋涡混合3min，以3000r／min离心5min，取上清液2OL，过0．45／~m滤膜，上高效液相色谱仪测定。分析得回归方程：．)，一5．689x+87．332

8、，r。=0．9992。线性范围为2-80／~g／dI。3．3回收率试验取含已知量维生素A的正常人血清200／~L，加入含一定浓度内标液的无水乙醇，定量加入一定浓度的维生素A，用正己烷400gI提取，进样20gI。分析，见表1。表1血清维生素A回收率分析(~g／dL)样品号加入量测得量回收率()30．6930．554O．3639．4143．574