反向迁移毛细管胶束电动色谱分离测定复方丹参片中5种皂苷的含量

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1、第35卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第1期2007年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry115一118反向迁移毛细管胶束电动色谱分离测定复方丹参片中5种皂普的含量叶妹王书芳瞿海斌程翼宇*(浙江大学药物信息学研究所，杭州310027)摘要采用反相迁移毛细管胶束电动色谱方法分离测定了复方丹参片中人参皂昔Rd,Rb1,Rg1,Re和三七皂昔R1等5种皂昔的含量。考察了SDS、有机改性剂和磷酸浓度、样品溶剂及进样时间对样品分离和检测灵敏度的影响。最佳缓冲溶液组成为:10mmoUL磷酸一140mmoULSDS-14%(V

2、/V)乙rn-15%(V/V)异丙醇(pH二2.4)，样品溶剂为20%甲醇-10mmol/LSDS，压力进样时间为12s。在最佳条件下，5种组分在27min内达到高效分离(柱效为1.1一1.6x106N/m)，在一个数量级浓度范围内线性相关系数为0.9975一0.9993,日内和日间精密度分别小于4.8%和5.5%，回收率为%.5%一103.6%。该方法用于复方丹参片中皂昔类成分含量的测定，简单、快速、灵敏、准确。关键词毛细管电泳，反向迁移胶束，复方丹参片，人参皂昔，三七皂昔1引言复方丹参片由丹参、三七和冰片三味药组成，有活血化痕、理气止痛之功效，用于心血管疾病

3、可显著扩张冠状动脉，增加血流量，减少心肌耗氧量，改变血液流变性。由于其疗效确切，不良反应少，是临床治疗冠心病、胸闷和心绞痛的常用中成药〔’周。三七中的皂昔类成分是其重要的有效成分。目前，测定复方丹参片中皂昔类成分的方法有HPLC法[’，’]和比色法[’〕。但文献中所采用的HPLC法，样品预处理方法繁琐，而且只测定了人参皂昔Rgl和Rblt3〕或三七皂昔R1含量[’];比色法只测定了三七总皂昔含量[5]。有些人参皂昔的结构很相似，如人参皂昔Rgl和Re，采用HPLC法分离比较困难，分析时间通常>1h。由于人参皂昔和三七皂昔成分的紫外吸收为末端吸收，采用低波长检测有

4、利于提高其检测灵敏度，而HPLC法中检测波长一般不能低于203nm，否则梯度洗脱时基线漂移严重。毛细管电泳具有分离效率高、分析速度快、样品和试剂消耗量少等优点。本研究首次采用反向迁移毛细管胶束电动色谱法同时分离测定了复方丹参片中人参皂昔Rd,Rbl,Rgl,Re和三七皂昔R1的含量，方法简单、快速、灵敏、准确。2实验部分2.1仪器与试剂AgilentHPID型毛细管电泳仪，配有二极管阵列检测器(190一600nm)，数据采集和分析采用Chem-Station色谱工作站(美国Agilent公司)。石英毛细管(河北省永年锐洋色谱器件有限公司)为70cmx75Rmi.

5、d.，有效长度为61.5cm。人参皂昔Rb1,Rgl,Re和三七皂昔R1(中国药品生物制品检定所)，人参皂昔Rd(吉林大学)，袖皮素(内标)(Sigma公司)。复方丹参片为市售品(杭州胡庆余堂药业有限公司，批号为050825,050310和050722;广州白云山中药厂，批号为04031010和05041011)0H3PO4和十二烷基硫酸钠(SDS)为分析纯，乙睛、甲醇和异丙醇均为色谱纯。水为Milli-Q水。2.2对照品储备液、内标和缓冲溶液配制精确称取对照品适量，用20%甲醇一10mmol/LSDS溶解，配制成含有540m岁LRd,1000mg/LRbl,2

6、006-04-25收稿;2006-07-13接受本文系国家重点基础研究发展计划(973计划)资助项目(No.2005CB523402)*E-mail;chengyy@zju.edu.cn分析化学第35卷1045mg/LRgl,495mg/LRe和495m岁LRl的对照品储备液。低浓度对照品溶液用适量的20%甲醇-10mmol/LSDS溶液稀释制得。精确称取袖皮素适量，用5%甲醇水溶液溶解，使其浓度为102m岁L,作为内标储备液。标准品与内标以4:1的体积比混匀后进样。缓冲溶液是分别精确量取适量的200mmol/LH3P04,400mmol/LSDS、乙睛和异丙醇

7、于10mL容量瓶中，加水定容至刻度。所有溶液在使用前均用0.45[tm醋酸纤维素膜过滤。2.3供试品溶液制备取复方丹参片20片，精确称定、研细，取0.2g粉末，精确称定，置2mL容量瓶中，加20%甲醇-10mmoULSDS溶剂适量，超声30min后，冷却，用20%甲醇-10mmol/LSDS溶剂定容至刻度，摇匀，用0.45}Lm醋酸纤维素膜过滤，续滤液作为供试品溶液。2.4阴性样品溶液的制备按照复方丹参片的制造工艺〔’〕，制备不含三七药材的模拟复方丹参片，再按2.3节方法制备阴性样品溶液。2.5实验方法毛细管柱在第一次使用前依次用乙睛冲洗10min,0.1moU

8、LHCl冲洗10min、