茯苓多糖深层发酵、提取的参数控制及羧甲基化改性研究

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1、河南大学硕士学位论文茯苓多糖深层发酵、提取的参数控制及羧甲基化改性研究姓名：陶跃中申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：杨生玉20100501河南大学20lO祸硕+{：研究生学位论文中文摘要茯苓是一味珍贵的药食两用菌，也是传统的中药材；茯苓多糖具有增强免疫、防治肿瘤等生物活性，而且许多新的生物学作用也在不断发现和利用。目前，茯苓多糖主要通过野生或人工种植获得，周期长、成本高；而深层发酵法生产茯苓多糖则具有周期短、成本低等优点。采用液体发酵及分离提取等新技术，已成为茯苓多糖等活性物质工业化生产的新方向。本文以茯苓菌株HD08．10为研究材料，通过深层

2、发酵，优化其发酵参数并确定其最适的发酵培养基；对茯苓发酵菌丝体多糖提取分离，对其提取工艺参数进行优化；以获得的多糖为原料合成羧甲基茯苓多糖(carboxyrllethylpachymar柚，cMP)，并优化其制备工艺；通过多步纯化、组分分析、理化结构性质鉴定等方法和手段研究CMP，并分析多种冈素对CMP黏度的影响，为扩大茯苓多糖及其衍生物的应用范围奠定理论基础。主要研究结果有：·以菌体生物量和多糖产量为指标，对碳氮源种类及比例、pH值、培养温度、摇瓶转速、装液量以及接种量等参数进行参数控制研究；并通过正交试验设计，最终确定了发酵培养基配方及发酵过程参数

3、为：葡萄糖4％、蛋白胨O．75％、硝酸钾0．75％、硫酸镁0．05％、磷酸二氢钾0．1％、pH5．5、温度26℃、转速150r／m、装液量80mL、接种晕6％。采用响应面分析法对茯苓发酵菌丝体多糖的提取参数进行了优化，并确定最佳工艺参数为：提取时间4．3h，提取温度73．8℃，水料比29．8：l。此条件下茯苓多糖理论提取率达到2．45％，验证试验多糖提取率可达2．57％，模型与试验拟合较好，自变量与响应值间的线性关系显著。因此，采用响应面法优化得到的参数准确可靠，具有实用价值。采用正交试验法对CMP的制各工艺优化，并确定最佳条件为：温度50℃，NaoH

4、l％，氯乙酸7g；对CMP进行多步纯化、组分分析和理化结构性质鉴定，表明仅由羧甲基葡萄糖组成，糖环为吡喃型，糖苷键以肛1_3)连接为主，分子量约为4．2×104Da；对黏度特性进行研究，发现浓度、温度、pH值以及r尤机盐等因素与CMP的黏度有很大相关性。关键词：茯苓多糖深层发酵提取参数控制羧甲基化黏度特性ABSTRACT尸D，加∞c∞isaValuablemedicinal柚dedible如ngus，whichalwaysbeusediIl舰ditj彻alChiIlesemedicine．Pachynl锄c觚improVeimmune劬ctions，p

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