香菇菌丝深层发酵及多糖提取分离研究

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1、《广州食品z业科技》GuangzhouFoodScienceandTechnologyVol.20No.1(总79)中图分类号:T0420.6;文献标识号:A;文章篇号:1007-2764(2004)01-0022-62香菇菌丝深层发酵及多糖提取分离研究邵伟鲁林李雪峰刘珍(三峡大学化学与生命科学学院，宜昌443000)摘要:采用液体发醉培养的方法获得香菇发酵液iLEL)，发酵液经离心，提取得胞内粗多据iLEPI)，再经DEAE柱层析得到一种蛋白多据复合物，然后用Supdex200%层析显示为单峰.关键词:香菇:液体发酵

2、;多籍香菇(LentinusModes)是一种味道鲜美，营养价台式恒温振荡器、超净工作台、DEAE层析柱分离值很高的食用菌，其蛋白质中含有18种基本氨基酸，系统、Supdex200凝胶过滤层析柱等。其中人体所必需的8种氨基酸全部具备，特别是食用1.5培养方法菌中所含有的香菇多糖，具有一些独特的生理功能，斜面菌种培养:于27℃培养箱中培养5d.有较高的药用价值，经常食用能益味助食，化痰理气，液体摇瓶菌种:在500mL三角瓶中装入150ML的对预防人体皮肤炎症和坏血病等有一定的疗效，且无培养基，于27`C,150r/min

3、的转速进行摇瓶培养，培任何毒副作用。近年来我国对于香菇多糖的研究较多，养时间5d,但主要集中于用子实体提取方面，而采用液体发酵培1.6菌丝体胞内多糖的提取及检测养菌丝体来分离提取香菇多糖研究的报导较少，为此发酵液经离心、菌丝体经超声波破碎、热水浸提，我们对香菇进行了液体培养和胞内多糖的分离提前进再于40C醇析过夜，经脱蛋白川，脱色I2]，透析，浓缩，行了探索，为深入研究这种药食兼用真菌的提供理论冷冻干燥得胞内粗多糖。取上述胞内粗多糖35mg过依据。DEAE柱，以PH6.5磷酸盐缓冲液,NaCl溶液梯度洗脱，5ml/管部

4、分收集，再经苯酚一硫酸法测定所收集各管多材料与方法糖的含量。取第一个洗脱峰的洗脱液，经透析、冷冻1.1菌株干燥得胞内多糖纯化物。取6mgLEPI上Supdex200柱，香菇(Lentinusedodes)，引自华中农业大学食用超纯水洗聪流速为0.25ml/min,Iml/管部分收集，菌培育中心，由本所保藏。220nm,280n，波长下检测;用苯酚一硫酸法检测经凝1.2分析试剂胶过滤的多糖含量。所有分析试剂均为分析纯。1.7分析测定方法1.3培养基还原糖(以葡萄糖计)含量测定:廉爱农法[27马铃薯斜面培养基:将马铃薯(去

5、皮)200g，切发酵液胞外多糖含量的测定:3000r/min离心所成约2cm2的小块，放入15阅mL的烧坏中煮沸得上清液，取30ml，加3倍体积95%乙醇，于4℃冰箱中30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布醇析工8h,离心，取沉淀于80℃烘至恒重。过滤，取其滤液加蔗糖20g，再补足水至1000mL,pH发酵液固形物含量的测定:取50ml发酵液，3000r自然，1160C，灭菌20min，用于香菇增殖培养。加in离心15min，菌体经多次冲洗后，于80℃烘至恒液体摇瓶培养基(%):葡萄糖2、玉米粉1.鼓皮重(

6、9)1,MP040.2,MgS04.7Hz00.2,CaC1z0.1,pH自然，2结果与讨论1210C，灭菌20mino1.4主要仪器2.1液体摇瓶培养情况收稿日期二2003-11-05液体摇瓶培养基接种后，于27`C,150r/min的转作者简介:邵伟(1966.10-)，男.高级工程师，公开发斑论文50余拍。目速进行摇瓶培养，培养5d后，发酵液呈棕褐色布满菌前主要从布新t品开发与发的食品的教学与研究工作.丝，发酵过程中pH、还原糖的变化情况，见图1,万方数据‘广州食品工业科技》GuangzhouFoodScienc

7、eandTechnologyVol.20No.l(总79)要组成部分集中在第2管洗脱溶液中。由于LEPI具有280mn的吸收，因此，推测其可能是一种蛋白聚糖复刀︵1撞合物。用苯酚一硫酸法检测各管多糖含量，结果见图403姗魂暇翻石溯言翻夏︶-撇123ud466如姗扭一于pH杏还原抽镜侧500图1发酵过程中pH、还原精的变化情况。1012141618202224262830管号官门5八.U目一、‘圈41-30胞内多辘含1t变化情况)司0﹃U喇.如图4表明，经DEAE层析后，多糖含量在第2管达口怕5n到高峰，占胞内多糖组成的

8、绝大部分。而其他各管多U糖含量相对较低，第10^30管多糖含量如图5所示。一于多摘含1t‘生物且︵启图2发醉过程中生物1t、胞外多糖含，变化情况1己翻从图1、图2可看出，随着发酵的进行，pH开始如娜下降，于第4d至第7d基本维持在5.0左右，而还原叭糖含量则呈下降趋势，第7d降止0.5g/100ml左右。同时胞外多糖随着生物量的增