蜂花粉中黄酮类化合物的检测及纯化方法的研究

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1、中国农业科学院硕士学位论文蜂花粉中黄酮类化合物的检测及纯化方法的研究姓名：孙丽萍申请学位级别：硕士专业：特种经济动物饲养指导教师：董捷20051001插图清单图1．12一苯基色原酮(黄酮)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6图2—1聚酰胺法芦丁标准品吸光度一浓度标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18图2．2比色法芦丁标准品吸光度一浓度标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19图2—3双波长法芦丁标准品吸光度．浓度标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20图2．4不同前处理对检测结果的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20图3．1芦丁标准品吸光度．浓度标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28图3—2室温下聚酰胺对黄

2、酮类化合物的静态吸附动力学曲线⋯⋯⋯⋯⋯32图3．3室温下黄酮类化合物质量浓度对聚酰胺树脂吸附性能的影响⋯⋯33图3，4室温下黄酮类化合物质量浓度对聚酰胺树脂吸解附性篚的影晌⋯33图3．5上样量对聚酰胺吸附率的影响结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34图3．6料液浓度对聚酰胺吸附的影响结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35图3．7料液酸碱度对聚酰胺吸附的影响结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35图3_8不同体积分数的乙醇与吸附量和解吸率的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37图3—9不同酸碱度的乙醇与解吸率的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37图3．10洗脱剂的用量对洗脱效果的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38V中固农

3、业科学院硕士学位论文第一章绪论1．1研究的目的和意义第一章绪论花粉是植物的雄性细胞，是植物的“精子”。蜜蜂采集回巢的花粉，称为蜂花粉。蜂花粉中除含有一般花粉的成分外，还含有蜜蜂在采集时加进去的少量花蜜和分泌物，因此蜂花粉与一般花粉的成分略有差异。其外表也不同干粉末状的花粉粒，而是经蜜蜂加：L过的多为扁圆形的、上面带占襄靶羹≥量聋}副馨舅"蠢；弭葡归爵穆q孙髓n肇餮羹西秆雾薷薪黎；再妻毒至争量萋豢霸耋盆篙鬻M毯塑上弓～；蛆耥菊，怕带i卧馥蠡j蠡国苍嚣菰豢季罂最囊彭攀。壕妻}勺6标§娶篓托姐黔!誊国岽馐罐蠹彭姿孓聿蘸；》影。馕衙‘丹离蠹羹；“一⋯嚣壁=蓊娃筇螽；婴有鬓薹童2。璎i手

4、薤}耄l疆馒慨诺莉垂窄蠡难：i一一佘堑鬻篓美j一一等缺点莼i蟛攀囊i辇耳班疆鬟委意鬟j芑嘎氇哩童以通过质谱检测器检测到分离成分的分子量大小，从而可以对该物质进行定性，也就是说，Lc．Ms可以不f_}；i标准品作定性分析，但是以Lc，MS进行定量分析时也必须使用标准品。同时，Lc—Ms设备昂贵，操作繁琐。气相色谱(Gc)适应于挥发性物质的检测，而蜂花粉黄酮类有效组分属难挥发性物质不宣用气相色谱(Gc)检测。紫外可见分光光度法刚二vIs)操作简便，检测时间短，设备要求不高，准确性好，灵敏度高，在天然产物研究领域占有非常重要的地位，特别是在检测某～类物质总含量时它是首选的方法。目前，

5、国内外对总黄酮的检测有若干种方法：比色法、胶束毛细管电泳法、高教液相色谱(HPLc)法等，大量实验数据表明，对于蜂花粉中黄酮类化合物的含量，采用不同分析方法所得到的结果不同。比色法是在碱性溶液中加A1”与3．羟基黄酮、5-羟基黄酮进行络合反应，利用颜色和含量关系进行比色测定的方法。这是早期常用的方法，由于此法设备廉价。操作简单，现在国内有许多文献报道的仍然采用此法(梁惠花，2003；魏永生，2004；王开发，2004)。比色法用于组成单一的标准对照物时，结果准确，但当应用于组成复杂的植物试样时，比如花粉黄酮提取液，由于花粉组成复杂，受到花色素、鞣酸及其它酚性成分等多种物质的干扰

6、，在碱性条件下，许多多元酚都可与Al”发生同样的显色反应，而且底液常常出现混浊现象，从而影响结果的准确性，使得测定结果远远高于蜂花粉总黄酮的实际含量。为克服底液强吸收带来的干扰，研究人员对传统的比色法进行了改进，陈郑镔在使t珥j传统的硝酸锅显色法时先用聚酰胺对样液进行吸附，以减少非黄酮类物质的显色干扰。郑敏燕(2004)采州敏波长分光光度法，使用510m为测定波长，584I】In为参比波长，采用比色法测定油菜蜂花粉中的总黄酮，由于扣除了底液混浊等背景干扰，取得了比较满意的实验结果。但双波长比色法的原理基于比色法，许多测定条件如稀释用乙醇浓度、显色时间等都能影响比色法的最终结果，

7、导致测定结果偏高、熏现性不好。比色法仪器操作简单方便，HPLC法测定的线性关系、重复性、稳定性均较好．同收率高，但由丁蜂花粉中黄酮种类繁多，现有标准品不能涵盖其黄酮种类，鉴定黄酮结构并制备标准品费，【_

8、j昂贵、时间周期长，所以HPLc法亦不适用于蜂花粉总黄酮的检测。闪此，建立方便、准确的中国农业科学院硕士学位论文第二章蝉花粉总黄酮榆测方法的研究聚酰胺．紫外分光光度法是检测保健食品中黄酮类化合物的常用方法，具有操作简单，设备要求低，检洲速度快．重现性好，灵敏度高等优点，但在蜂花粉黄酮检测中未