不同培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌菌苗抗原的免疫原性比较试验(2)

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1、+0+中国兽药杂志!!!!!!!!!!"&&0"%/!,#,0",-沈志强"等!不同培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌菌苗抗原的免疫原性比较试验沈志强!刘吉山!李峰!徐可利!赵蕾!吴信明!林初文!山东省滨州畜牧兽医研究所!山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中心"山东滨州!"’,,!/#!基金项目"山东省重大科技攻关项目"鲁科计字$!...%第"’%号文&鲁财工字$!...%%"号文!收稿日期""&&%&$"/!!文献标识码"c!!文章编号"!&&"!"/&!"&&0#&,&&&0&%!!中图分类号")/’.#$.$E%%!摘!要"!为比较不同

2、培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌抗原的免疫原性!对禽多杀性巴氏杆菌标准强毒株30/*!株采用固体表面培养法和液体高密度发酵法制备疫苗并进行了免疫对比试验"结果表明!固体表面培养法制备的抗原菌体形态结构较均一!抗原成分稳定一致!并且含有较丰富的荚膜#而液体高密度发酵法制备的抗原形态结构大小不一!抗原成分不够稳定一致!含荚膜也较少"将两种方法制备的抗原按相同工艺制备成禽霍乱蜂胶灭活疫苗!效力检验结果显示二者差异极显著!固体表面培养法制备的疫苗免疫后!0G和.&G时保护率均为/&="!&&=!平均.%=#液体高密度发酵法制备的疫苗免疫后!0G和

3、.&G时保护率分别为0&=",&=$,&="/&=!平均为’%=和,$="!关键词"!禽多杀性巴氏杆菌#免疫原性#固体表面培养法#液体高密度发酵法#培养工艺!!自从微生物学家47^JKRC成功培育出了世界上株"由中国兽医药品监察所提供’第一个家禽疫苗(禽霍乱弱毒疫苗以来"世界各国!#!#"!培养基!固体表面培养法制苗用固体培养的科学家关于禽霍乱的研究就从未中断过"但到目基为改良马丁琼脂"液体高密度发酵法制苗用培养前为止"除日本宣布消灭了禽霍乱以外"其他国家均基为改良马丁肉汤"二者均为自制’有不同程度的发生"而且在某些国家其危害程度还!#

4、!#%!试验动物!/&"!$&日龄的健康新罗曼蛋$!%越来越大"已引起各国的重视’各国控制禽霍乱鸡!%#$&只"本所畜禽良种试验基地提供’的主要措施都是疫苗接种’目前"禽多杀性巴氏杆!#!#0!蜂胶佐剂!由山东省畜禽用蜂胶疫苗研究菌菌苗抗原的培养工艺主要有固体表面培养法&液开发推广中心提供’体通气培养法&液体浅层静置培养法和液体高密度!#!#’!仪器!PTM)E!&3型发酵罐"镇江东方生物发酵法"我国)兽用生物制品制造与检验规程*中规工程设备技术公司生产’定的培养工艺主要是固体表面培养法和液体通气培!#"!方法$"%养法’在使用相同生产

5、菌株的情况下"采取何种!#"#!!菌种传代!将标准强毒30/E!株接种健康培养工艺生产出质量高&数量大的疫苗抗原是生产易感鸡继代"采取病死鸡的肝脏"划线接种于加有上急需解决的问题’本研究对固体表面培养法和液&#!=绵羊裂解血和"="0=血清的改良马丁琼脂体高密度发酵法制备的禽多杀性巴氏杆菌疫苗进行表面"%$F培养!/""0:"连续传代"次后作为生了免疫原性对比试验’产种子"置0F冰箱内保存备用’!!材料和方法!#"#"!灭活菌液的制备!#!!材料!#"#"#!!固体表面培养法制备抗原!将标准强毒!#!#!!菌种!禽多杀性巴氏杆菌标准强毒

6、30/E!30/E!株的生产种子接种于加有&#!=绵羊裂解血沈志强!!.万方数据,%年"#男"研究员"主要从事预防兽医学与生物制品学的研究与开发’!"&&0!%/’,(+0","沈志强!等!!!!!!!!!!中国兽药杂志*’*和"="0=血清的改良马丁琼脂表面!%$F培养!/使含菌量为!L!&!&3dT"6

7、F冰只鸡!!6<"只!分别于免疫后第!0天和第.&天以箱内保存备用#按上述方法制备%批抗原#标准强毒30/E!株进行攻毒试验!攻毒时实际攻毒!#"#"#"!液体高密度发酵法制备抗原!将标准强剂量分别为/3dT"只和$3dT"只!分别设"只对毒30/E!株的生产种子接种于装有改良马丁肉汤的照!观察!0G!记录鸡只发病死亡情况!计算其保护PTM)*!&3型发酵罐内!%$F通气高密度发酵培率#养!/:!检验纯粹并计数后加入&#%=的甲醛!"!结果%$F灭活!/""0:!作无菌检验合格后置于0F冰"#!!两种方法制备抗原的形态结构观察结果!两箱

8、内保存备用#按上述方法制备%批抗原#种方法制备的抗原均为’&#""�(’&#,""#’(!6L!#"#%!两种方法制备的抗原的形态结构观察!分!6的革兰氏阴性杆菌!单个或成对存在#固体表面别取两种方法制