不同ph对糙海参消化酶活性的影响

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1、维普资讯http://www.cqvip.com2第00264年卷l第2月4期NATURALSCⅢ海N南CE大Jo学U学RN报AL自o然FH科A矾学A版NII、RSnYV01．24No．4Dec．20o6文章编号：1004—1729(2006)04—0389—06不同pH对糙海参消化酶活性的影响姚雪梅，王琚，贝荣丙，邢少雷(海南大学海洋学院，海南海口570228)摘要：研究了不同pH条件下糙海参前肠、中肠及后肠的蛋白酶和淀粉酶比活力的变化．结果表明：1)糙海参前肠和中肠在pH=3，后肠在pH=l0时，其蛋白酶的比活力最高；糙海参前肠和中肠蛋白酶的最适pH值在酸性范围，后肠蛋白

2、酶的最适pH值在碱性范围；2)糙海参前肠淀粉酶在pH=3，中肠和后肠淀粉酶在pH：7时，其比活力最高，前肠淀粉酶的最适pH值在酸性范围，中后肠淀粉酶的最适pH值在中性或偏碱性范围；3)糙海参的整个肠道均能消化蛋白质与淀粉，中后肠是淀粉消化的主要场所；4)淀粉酶的比活力高于蛋白酶的比活力，这与其摄食底栖藻与腐屑的食性相吻合．关键词：糙海参；消化酶；pH；前肠；中肠；后肠中图分类号：S968．9文献标识码：A海参属棘皮动物，分布于世界温带区和热带区，目前已知种类约有1000种，其中已开发的有海参科中的辐肛海参属、海参属和刺参科中的刺参属、类刺参属及梅花参属，总计约有l2种．热带区

3、的海参资源呈多种性，分布于太平洋热带区以及印度洋]，具开发前景的有lO余种．我国是一个海参资源比较丰富的国家，近几年来，在我国的北方也掀起了人工养殖海参的热潮，有关海参的各种知识逐渐被人们所关注；但是，在我国的南方，海参的养殖仍然还没有被广泛地推广起来．而目前国内外对热带海参的研究报道还比较少，这在一定程度上影响了海参的增养殖．因此，对其开展进一步的研究是十分必要的．糙海参(Holothuriascabra)属热带海参，商品名为明玉参，又名糙参、白玉参．糙海参作为人类的食品，不但具有很高的营养价值，而且还具有极高的药用价值．尽管许多研究者曾对糙海参进行过研究，如沈鸣等研究了糙

4、海参多糖纯化工艺优选及其产物的药理活性；闫冰等研究了糙海参中三萜皂苷的活性成分，但是，本文却是从糙海参消化酶的活性及其在不同pH条件下的活性方面，研究了热带海参，旨在为研究海参食性和人工饲养糙海参提供一定的依据．1材料与方法1．1材料来源本实验所用的材料来自2006年5月5日从海南三亚捕捞的新鲜糙海参(潜水取样，水深约为10m)，它原生活于珊瑚礁周围，体色背面为棕黄色，腹面为白色．所取海参的体质量为400～500g，体长为22～25cm．收稿日期：2006—06—23基金项目：海南省自然科学基金(80532)作者简介：姚雪梅(1972一)，女，山东济宁人，海南大学海洋学院讲师

5、，硕士维普资讯http://www.cqvip.com390海南大学学报自然科学版2006正1．2材料处理及取样部位将糙海参低温运输到实验室，在称量其体质量和测量其体长之后，立即对其进行解剖，并取出消化道．由于糙海参不具消化腺，所以只对其消化道进行分部取样，取样部位分别为：前肠(包括食道、胃及第1部分下降肠)、中肠(上升肠)和后肠(包括第2部分下降肠)．1．3方法1．3．1消化道的pH测定取新鲜的糙海参，解剖取出消化道，并用玻璃棒分别蘸取糙海参的消化道(前肠、中肠、后肠)液，以精密pH试纸测定其pH值．1．3．2酶粗提液的制备取出消化道后，用冷冻去离子水冲洗消化道，并将前肠、

6、中肠、后肠称重，然后分别置于玻璃匀浆器中充分研磨5—8min，并加入l0倍质量的冷冻去离子水，整个操作在冰浴中完成．在4cI=条件8000r·rain离心20min后，取上清液．此上清液即为酶粗提取液，一80℃低温保存备用．．1．3．3蛋白酶活性的测定采用福林一酚试剂法(略加修改)，用722型分光光度计测定pH值对糙海参不同消化道部位的蛋白酶活性的影响，温度为37℃．测定方法：每个样品加入0．5ml-O=0．01g·mL的酪素和0．5mL不同pH的选择性缓冲液，预热2min后，加入0．5mL预热好的酶粗提取液，并于37cI=的恒温水浴箱中反应15min，接着加入1mL‘D=0

7、．12的三氯乙酸以终止反应．接着于25aI=条件下，以4000r·min的转速离心10min，取上清液0．5mL，加入2．5mLc=0．55mol·L的Na~CO3溶液，再加入0．5mL福林试剂，然后置于37℃的恒温水浴箱中显色15min，接着在680nm波长下比色，并以蒸馏水校零，此外，在加入酶粗提取液之前，先在对照管中加入1mL=0．12的三氯乙酸，以使酶失活，其他同试验管．不同pH的选择性缓冲液分别为：0．05tool·L的甘氨酸一盐酸缓冲液(pH=3．0)；0．067tool·L的磷酸缓冲液(p