咖啡酸苯乙酯对大肠癌hct116、ht29细胞中βcatenin及vegf表达的影响

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1、中南大学硕士学位论文咖啡酸苯乙酯对大肠癌HCT116、HT29细胞中β-catenin及VEGF表达的影响姓名：祝藩原申请学位级别：硕士专业：消化内科指导教师：霍继荣20080501七年制坝lj学位论文咖啡酸苯乙酯对大肠癌HCTl16、H129细胞中p-catenin及VEGF表达的影响摘要研究背景：大肠癌的治疗是关系患者预后的重要因素，而Wnt信号通路中关键基因13-catenin和VEGF已成为大肠癌治疗的新靶点，咖啡酸苯乙酯(caffeicacidphenethylester，CAPE)是蜂胶抗肿瘤作

2、用的主要活性成分，它可以作用于Wnt信号途径并抑制其相关蛋白表达而发挥抗癌作用。目的：研究咖啡酸苯乙酯(caffeicacidphenethylester，CAPE)对体外培养的大肠癌HCTl16、HT29细胞生长及J3-catenin和VEGF表达的影响。探讨CAPE的抗肿瘤作用机制，为咖啡酸苯乙酯的大肠癌临床治疗提供理论依据。方法：体外培养HCTll6和HT-29细胞至对数生长期后予细胞种板，用不同浓度CAPE(2．5、5、10、20、40、80rag／L)分24，48小时两个时间段处理，与未处理组进行

3、对照。采用细胞计数方法，分析不同浓度CAPE作用后，对大肠癌细胞生长和增殖的影响。采用免疫细胞化学二步法检测处理后各细胞爬片中13-catenin，VEGF的表达情况，并分析不同浓度及不同时间CAPE作用后蛋白表达的差异，对13-catenin和VEGF两种蛋白表达强度相关性进行检验。结果：不同浓度的CAPE作用HCTl16和HT29细胞后，均可见悬浮细胞增多，培养液中有较多的细胞碎片，细胞内出现颗粒样物质，细胞七年制硕Ij学位论文浆混浊，胞体缩小、变圆、皱缩，核固缩碎裂等凋亡形态学特征。对药物处理后的细胞

4、计数发现，随着CAPE浓度的增高作用时间的延长，细胞的数量逐渐减少，HCTl16和HT29细胞的生长和增殖明显受到抑制，呈剂量和时间依赖性的特点。免疫细胞化学检测结果显示：CAPE分别处理HCTl16和HT29细胞后，13-catenin在胞核及胞浆中的表达下调，而在细胞连接处表达上调，VEGF在胞浆中的表达减弱甚至消失。不同剂量的CAPE(2．5、5、10、20、40、80mg／L)作用HCTl16和HT29细胞不同时间(24、48h)后，细胞13-catenin、VEGF表达强度均有不同程度的下降，与对

5、照组(未加药物干预)比较有显著性差异p

6、的异常表达，可能是其抗癌作用的重要的分子机制之一。13-catenin和VEGF蛋白表达强度之间有较强相关性，提示CAPE作为一种Wnt通路抑制剂，可能通过抑制Wnt信号通路的上游靶基因13-catenin表达，进而影响其下游靶基因VEGF的表达。关键词：大肠癌，p连环蛋白，血管内皮生长因子，咖啡酸苯乙酯，免疫细胞化学Ⅱ七年制硕_t：学位论文英文摘要TheeffectofcaffeicacidphenethylesteronD·cateninandVEGFinthecolorectalcancercelll

7、ineHCT16andHT29ABSTRACTBackground：Thetreatmentofcolorectalcancerisanimportantfactorrelatedtotheprogressofdisease．IB-cateninandVEGFwhicharethekeygeneinWntsignalingpathwayhasbecomethenewtargettothetreatmentofcolorectalcancer．caffeicacidphenethylester(CAPE)is

8、themajoractiveingredientoftheanti—tumoreffectsofpropolis．ItcanactontheWntsignalingpathwayincolorectalcancertoinhibititsassociatedproteinexpression．objective：Tostudytheeffectofcaffeicacidphenethylester(CAPE)on