油菜蜂花粉中粗蛋白的分离

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1、中困养蜂学会蜜蜂产品专qk委员会第七次学术研讨会会议论文2006．1l北京油菜蜂花粉中粗蛋白的分离董捷+孙丽萍朱晓丽(中国农业科学院蜜蜂研究所，北京10093)摘要：蜂花粉中的含氮量相当丰富，其中油菜蜂花粉中总含氮量在30％左右，其中游离态的氮含量为3．3％左右。但足蜂花粉中的蛋白质种类比较复杂，仅靠单一的溶剂很难将其中的蛋白提取完全，本文利用不问的溶剂在不同的条件下对油菜蜂花粉蛋白进行提取，将花粉蛋白分为水溶性、盐溶性、醇溶性、碱溶性和难溶性蛋白，并计算它们在蜂花粉中各自的含量。关键词：油菜蜂花粉；水溶性蛋白；盐溶性蛋白；醇

2、溶性蛋白；碱溶性蛋白；难溶性蛋白蜂花粉是自然界中存在的营养最丰富的一种食品，并且营养成分搭配合理，有利于人体吸收，另外它还含有许多功能冈子，能够加强人体的免疫系统和生理功能，已经日益受到人们的青睐H】。蜂花粉中蛋白质含量相当丰富，约占其干重的7％～35％亿31，氨基酸占总量的20％以上，游离氨基酸1％～2％【4’5】，但是蜂花粉中所含蛋白质的种类比较复杂，单一溶剂并不能将其中大多数的蛋白质分离出来。本文采用不同的溶剂对油菜花粉(Brassicacampestris)蛋白进行提取，对花粉蛋白的种类进行了初步的分离和研究。1材料和

3、方法1．1材料油菜破壁花粉(本实验室自备)：研钵；仪表恒温水浴锅；精密PH计购于梅特勒．托利多仪器(上海)有限公司；冷冻干燥机，北京松源华兴科技有限公司；真空干燥箱，上海一恒科技有限公司；低速大容量离心机，上海安亭科技仪器厂；半微鼍凯氏定氮仪；考马斯亮蓝G．250购于天津市科密欧化学试剂开发中心；牛血清白蛋白购于北京奥博星生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯。1．2方法1．2．1粗蛋白分离水溶性蛋白的分离：称取一定量的破肇花粉样品于研钵中，加少量的蒸馏水，研磨成匀浆。将研磨好的材料转移到离心管中。用蒸馏水冲洗研钵，并入离心管。

4、用玻棒搅拌离心管中的材料。用数滴水向下淋洗玻棒，离心，上清液转入50ml容量瓶。向离心管的沉淀中再加少量蒸馏水，搅拌5分钟，离心，上清液并入容量瓶。重复操作3次，最后加水定容至50ml。盐溶性蛋白的分离：向离心管中的残渣内加入10m110％的NaCI溶液，用玻棒搅拌5分钟，然后以盐溶液冲洗玻棒，离心。上清液转入50ml容量瓶。用同一盐液洗提3次，离心上清液并‘董捷，女，副研究员，主要从事蜂产品的开发与利用研究。E-mail：iiedong@126．eom23中冈养蜂学会蜜蜂产品专qk委f，3会第七次学术研讨会会议论文2006．

5、11北京入容量瓶，定容至50ml。醇溶性蛋白的分离：向上述盐液提取后的残留物中加入10m175％乙醇，用玻棒搅拌，将混合液置80℃的水浴中5分钟，在此期间要随时搅拌。其后取出离心管，继续搅拌5分钟，离心，收集上清液。用75％乙醇洗提3次，合并离心上清液，并以75％乙醇定容至50ml。碱溶性蛋白的分离：向上述醇液提取后的残留物中加入10m10．2％NaOH，用玻棒搅拌15分钟，离心，收集上清液。再用0．2％NaOH洗提3次(后面2次搅拌5分钟)。合并离心上清液，以0．2％NaOH定容至50ml。将以上收集上清和残渣用j卜微量凯氏

6、定氮仪进行定量测定。1．2．2粗蛋白的纯化提取的蛋白质溶液分别采用离心、透析和冻干等方法，将蜂花粉蛋白分离制备为水溶蛋白、醇溶蚩白、盐溶蛋白、碱溶蛋白等样品，供活性测定用。花粉水提液盐析沉淀，对沉淀物进行透析后，冷冻干燥得水溶蛋白提取物。花粉醇提液进行浓缩、透析和冷冻干燥得到醇溶蛋向提取物。花粉盐提液进行透析，冷冻干燥得盐溶蛋白提取物花粉碱提液调PH沉淀，对沉淀物进行透析后，冷冻干燥得碱溶蛋白提取物。2结果和分析根据蛋白质在不同溶剂中溶解度不同的性质，可将蜂花粉蛋白分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白等。表1表示的是蜂花

7、粉中各蛋白组分的分布情况。从表l可以看出在油菜蜂花粉中总蛋白含量可占到30％左右，蜂花粉中各种蛋白质分布相当，其中可提取出的蛋白质占蜂花粉总蛋白的80％，为蜂花粉蛋白的重要组成部分。其中水溶蛋白为33％、醇溶蛋白和碱溶蛋白分别为20％，还含有少量的盐溶蛋白，占总蛋白的7％左右，以及部分难溶的复合蛋白。表1各蛋白质组分在蜂花粉中的分布将纯化后各种花粉蛋白提取物进行蛋白质含量的测定，其结果如表2所示。由表2结果可以得出，花粉中醇溶性的大分子物质比较多，紧紧通过透析的方法很难将这些物质从蛋白中脱去。相比较而言，花粉中盐溶性的大分子物

8、质较少，通过透析能过得到比较纯的盐溶性蛋白质。表2纯化后各种蛋白提取物的蛋白含量提取物篮仁j含量(％)水溶蚩白提取物(40％盐析)水溶蛋白提取物(60％盐析)醇溶缢[

9、提取物盐溶蛋白提取物碱溶蟹【，j提取物64．4744．4524．8487．3474．75中国养蜂学会蜜蜂产品