鲢鱼鳞片胶原蛋白的提取

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第28卷第2期2008年3月·43·鲢鱼鳞片胶原蛋白的提取张海彬，王军玲。(1．信阳师范学院生命科学学院，河南信阳464000；2．武汉生物工程学院生物工程系，湖北武汉430415)摘要：利用酸和酶提取法，从淡水鲢鱼鳞片中提取酸溶性和酶溶性胶原蛋白。经紫外光谱分析显示，所提取的胶原蛋白与I型胶原蛋白标准品接近。氨基酸组成分析表明，ASC和PSC是典型的I型胶原蛋白。关键词：鱼鳞；胶原蛋白；提取中图分类号：$986．1文献标识码：A文章编号：1003—1278(2008)02—0043—03胶原蛋白是动物结缔组织

2、的主要成分，是动物体内磷酸氢二钠。胃蛋白酶购自Sigma公司，I型胶原蛋白购含量最多、分布最广的蛋白质。胶原蛋白广泛地存在于自Sigma公司，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒。动物的皮肤、骨骼、牙齿、韧带和血管中，起着支撑器官、1．2主要仪器保护机体的功能。胶原蛋白是由3条a肽链结合而成电子天平，恒温磁力搅拌器，紫外一可见光谱仪，氨的三螺旋结构。每一条a肽链在分子结构上都是左手基酸自动分析仪，高速冷冻离心机。螺旋，3条链在氨基酸的相互作用下，以同一轴为中心，以2方法右手螺旋方式形成3股螺旋。在胶原蛋白的肽链上，每3个氨基酸中就有3个Gly，形成r三肽Gly—X—Y的

3、重复2．1鱼鳞的前处理区域。超螺旋体中各链借助Gly残基聚在3股螺旋的中新鲜的鲢鱼鱼鳞，自来水清洗3遍，剔除混入的其它心轴上，而其它的氨基酸占据螺旋的外围位置。x、Y经杂质。然后将鱼鳞置于阴凉处自然风干。准确称取2g常是Pro或羟脯氨酸，羟脯氨酸的羟基对于氢键的形成以鱼鳞，浸泡在0．4mol／L的盐酸溶液中脱钙3h，用蒸馏水及3股螺旋的稳定也是必要的。J。同时，在胶原蛋白中冲洗干净。也含有羟赖氨酸，其残基位点还是潜在的糖基化位点，可2．2蛋白提取以发生半乳糖化或葡糖半乳糖化。具有良好的细胞适应取经上述处理的鱼鳞，浸泡在0．5mol／L的乙酸溶液性、细胞增殖、

4、促进伤口愈合作用，胶原蛋白具有止血功中，低温搅拌3d后，10000r／rain离心60min。残渣重复能，能促进血小板凝聚和血浆结块；具有较低的抗原性，提取1次，合并上清液，得到酸溶性胶原蛋白(ASC)粗提可生物降解；促进骨的形成，增强皮肤代谢作用等。因液。将沉淀溶于0．5mol／L乙酸溶液中，加入1％的胃蛋此，胶原蛋白现已广泛应用于食品、化妆品、营养保健品、白酶(1：3000)，低温作用3d后，10000r／min离心60生物肥料以及医用材料等领域。工业用胶原蛋白的主min。残渣重复提取1次，合并上清液，得到酶溶性胶原蛋要来源被局限在牛、猪的皮和骨中。近年

5、来，由于哺乳白(PSC)粗提液。动物疫病的爆发和人畜共患病的增加，使其安全性受到2．3胶原蛋白提纯了怀疑。世界各国都在积极寻找更安全的胶原蛋白来将ASC和PSC粗提液注入透析袋中，于5~C下对源，从水生动物中提取安全、卫生、无公害的胶原蛋白已0．02mol／L的Na2HPO溶液透析，每天更换1次透析液，成为各国研究的热门课题。透析3d，再用蒸馏水透析2d。透析袋中的沉淀即为胶胶原蛋白作为鱼类、甲壳类等水生动物肌肉结构的原蛋白。特性物质已有报道。在鱼鳞中蛋白质占鱼鳞总重的2．4uV扫描分析70％，主要是胶原蛋白和鱼鳞硬蛋白。本文以淡水鲢鱼将胶原蛋白溶于0．5m

6、ol／L乙酸溶液中，配成0．05％的鳞片为原料，对胶原蛋白的提取及其性质进行研究。的胶原蛋白溶液，以0．5mol／L乙酸溶液为空白对照，用紫外一可见光谱仪测定其吸收光谱。1材料2．5胶原蛋白氨基酸组成与含量分析1．1试验材料使用氨基酸自动分析仪测定胶原蛋白氨基酸组成及1．1．1材料鲢鱼鳞片取自河南省信阳市谭山包菜市含量。样品用6mol／L盐酸于110~C下水解24h，定容，注场。样测定。工作条件：2．6mm×150mm分离柱，内装日立1．1．2化学试剂浓盐酸(分析纯)，冰醋酸(分析纯)，2619号树脂，柱温53~C，缓冲液流速0．225mL／min。其中羟脯

7、氨酸和羟赖氨酸的测定方法参照《食品成分分析手册》。收稿日期：2007—01—15基金项目：信阳师范学院重点资助项目．2．6胶原蛋白浓度测定作者简介：张海彬，J969年生，男，河南南阳人，剐教授，主要使用考马斯亮兰蛋白测定试剂盒检测胶原蛋白浓从事鱼类病原病害防治研究度。标准曲线制备如表1。维普资讯http://www.cqvip.com·44·2008年3月水利渔业第28卷第2期表1胶原蛋白标准曲线的制备表2鱼鳞ASC和PSC氨基酸组成％氨基酸ASCPSC氨基酸ASCPSC测定液苏氨酸Thr0．490．94丝氨酸Ser4．794．66标准蛋白液／mL谷氨酸Gl

8、u10．5611．46脯氨酸Pro10．239．03