《胶原蛋白的提取》word版

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1、Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究 学科专业：动物学研究方向：生化制药 指导教师：魏泓教授研究生：王琳（2001345） 内容摘要本文围绕Ⅰ型胶原蛋白（CPⅠ）的制备及其理化性质进行研究，同时在其防止长波紫外线（UVA）对细胞的要用于填充深的皱纹，皮肤损伤造成的缺损（如青春痘疤）和修补脸形的缺陷等。其效果立竿见影，但注射到皮肤内的胶元蛋白会被人体逐渐吸收，因此其功效只能维持半年至一年，而且少数人群可能会出现过敏氧化损伤方面进行了初步探索，为CPⅠ的进一步研发提供理论基础和科学依据。以猪皮为材料，比较酸溶法、酶解法、中性

2、盐溶液法三种粗提方法，选择得率和纯度都较高的酶解法为最佳粗提法，结合高效液相色谱进行CPⅠ的分离纯化。CPⅠ理化性质鉴定结果表明：样品在223nm处有紫外最大吸收值；含有十八种氨基酸，氨基酸总量在90%以上；样品的蛋白质浓度为1.03mg/ml；SDS-PAGE测定CPⅠ由α、β、γ三条链组成；色谱分析纯度约为100%。通过小鼠急性毒性试验、豚鼠致敏试验、细胞毒性试验对自制CPⅠ进行整体水平和细胞水平的生物安全性评价，观察期内，小鼠未见异常毒性反应；豚鼠注射点无红斑及水肿情况；细胞毒性小于Ⅰ级，结果证明本方法制备的CPⅠ无毒副作用。评价CPⅠ

3、对UVA氧化损伤的L929细胞的保护作用。结果表明：随着UVA45照射时间的延长，细胞的活性明显降低，说明UVA对细胞的氧化损伤是明显的，其中表现为MDA的含量升高、GSH-px的含量降低。加入不同浓度的CPⅠ后照射同样的时间，MDA的含量有所下降、GSH-px的含量有所升高，其中50%CPⅠ组的效果极为显著（P﹤0.01）。提示该物质有防止UVA氧化损伤的作用。综上所述，利用酶解和高效液相色谱制备相结合的方法可以从猪皮中分离纯化CPⅠ，该方法具有高效性，高选择性和易放大性；理化性质鉴定及生物安全性试验表明，该物质为纯活性胶原蛋白，无毒副作用

4、；同时对体外细胞的UVA氧化损伤具有较好的保护作用。关键词：Ⅰ型胶原蛋白；高效液相色谱；制备；鉴定；氧化损伤45Studiesonthepreparation，identificationofCPⅠanditsprotectiveeffectoncellsdamagedbyUVAMajor:BiologySpeciality:ZoologyTutor:Prof.WeiHongAuthor:WangLin（2001345）AbstractInthispaper,howtoprepareCPⅠandidentifyphysico-chemical

5、propertyhadbeenstudied,andUVAoxidativedamageL929wasperliminarydiscussed.Thesedatasprovidedtheoreticfoundationandscientificproofforfurtherresearchanddevelopmentofthisproduct.Pigskinwasusedasmaterial.Accordingtothecomparationamongthethreekindsofcrudeextractionmethodsincluding

6、aciddissolve,enzymolysisandneutralsaltsolution.ThemethodofenzymolysiscombinedwithHPLCwaschosentoprepareCPⅠ.Thephysico-chemicalpropertyofCPⅠwasidentified.Theresultsshowedthat:CPⅠshowedcharacterabsorptionpeakat223nm;CPⅠhad18kindsofaminoacids,totalcountofaminoacidwasmorethan90

7、%;theconcentrationofproteinwas1.03mg/ml;CPⅠwascomposedofαchain,βchainandγchainbySDS-PAGE;OnepurepeakwithHPLCwasfoundedanditspuritywas100%.ThesecurityofCPⅠaccordingtotheexperimentsofmiceaccutetoxicitywasevaluated,Guineapig45sensitizationandcytotoxicityexperimentinintegerleve

8、landcelllevel.Itwasshowedthat:themicehadnotoxicreaction;theGuineapig’spointsofinje