明日叶总黄酮超声提取工艺优化及其dpph清除能力

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1、2016年12月中成药December2016第38卷第12期ChineseTraditionalPatentMedicineVol．38No．12明日叶总黄酮超声提取工艺优化及其DPPH清除能力1，211122何月秋，付涛，李文，毛阳正，李波，郑国强(1．宁波城市职业技术学院，宁波市园林植物开发重点实验室，浙江宁波35502;2．江苏碧云天农林科技有限公司，江苏丹阳212300)摘要:目的优化明日叶总黄酮超声提取工艺，并测定其DPPH清除能力。方法以提取时间、料液比和甲醇体积分数为影响因素，总黄酮得率为评价指标，在单因素试验基础上，

2、Box-Behnken响应面法优化提取工艺。再测定总黄酮DPPH清除能力。结果最佳条件为提取时间28min，料液比1∶25，甲醇体积分数93%，总黄酮提取量17.28mg/g，IC50为5.06μg/mL，其DPPH清除能力明显高于乙醇提取物。结论该方法可为明日叶总黄酮的提取和应用提供一定科学依据。关键词:明日叶;总黄酮;超声提取;Box-Behnken响应面法;DPPH清除能力中图分类号:Ｒ284.2文献标志码:B文章编号:1001-1528(2016)12-2703-04doi:10.3969/j．issn．1001-1528.2

3、016.12.038明日叶Angelicakeiskeikoidzumi为伞形科多年生草本植限公司);CF16ＲXⅡ离心机(日本日立工机有限公司);物，又名明日草、咸草、长寿草、长寿菜、八丈芹、滨海Spectrumlab755S紫外可见光分光光度计(上海棱光技术有当归、海峰人参等，原产于日本伊豆、八丈诸岛，被誉为限公司);XB70-FZ制冰机(美国Grant公司);电子天平21世纪的健康食品。其性喜冷凉至温暖，忌高温高湿，最(梅特勒托利多仪器上海有限公司);Milli-Q-超纯水仪(美适生长温度12～22℃，在中、高海拔地区可以全年栽

4、种，国Millipore公司)。而在低海拔或平原地区适于秋种，尤其在夏季日照强烈时1.2材料与试剂明日叶于2015年4月采自江苏丹阳碧［1］需进行遮荫处理。我国南方地区夏季高温高湿，并非明云天农林科技有限公司。样品采集后立即运回实验室，日叶最适生长区域，但通过林下种植，不仅能合理利用空－80℃下冷冻保存。芦丁、甲醇、乙醇、L-抗坏血酸、间资源，也为该植物在我国南方地区种植提供一种可行DPPH、氯化钠均为分析纯。模式。2实验方法明日叶富含维生素、矿物质、黄酮等次生代谢产物，2.1线性关系考察精密称取干燥至质量恒定的芦丁标准尤以含有非常罕

5、见的查尔酮为名，复杂的化学成分使其具品12.5mg，加甲醇定容至50mL，得250μg/mL芦丁标准有良好的抗菌、抗肿瘤、抗过敏、抗艾滋、抗糖尿病、降溶液，依次稀释成125、62.5、31.25、13.625、0μg/mL，［2-8］血压、降血脂等诸多功能，而且无任何副作用。目前，加入5%NaNO2、10%AlCl3和4%NaOH溶液，发现在日本企业界对明日叶的开发高度重视，已取得日本专利58420nm左右波长处，芦丁标准溶液吸光度最大，故选定在项，世界专利20项，广泛应用于食品开发、饮料、医药产该波长处测定。以吸光度(Y)对质量浓度

6、(X)绘制标准2品等领域。但我国起步较晚，20多年前才从日本引进，目曲线，得到回归方程Y=0.0009X－0.0012(Ｒ=［9］前仅台湾地区有广泛种植，因此有关研究报道相对匮乏。0.9999)，在0～250μg/mL范围内线性关系良好。黄酮是明日叶的主要化学成分之一，具有显著的生物2.2总黄酮提取与测定精密称取明日叶(叶、茎混合)活性，因此研究其提取工艺具有重要意义，但目前国内只适量，置于50mL离心管中，在不同条件下超声提取总黄［3，10］局限于以乙醇为溶剂进行提取，如溶剂提取、超声提酮，提取液离心，过滤，合并滤液(2次)，甲醇定

7、容至［11-12］［13-14］取、微波提取等，而尚未见甲醇提取。因此，本25mL，按“2.1”项下方法测定吸光度，求得提取液中总实验以甲醇为溶剂，对明日叶总黄酮进行超声提取，在单黄酮质量浓度，计算明日叶总黄酮含有量(W)，公式为因素试验基础上，采用Box-Behnken响应面法进行工艺优W=(C×V/m)×1000(C代表提取液中总黄酮质量浓化，可为该植物的开发利用提供一定科学依据。度，μg/mL;V代表提取液体积，本实验为25mL;m代表1仪器与试药明日叶质量，g)。1.1仪器SK5200G超声波清洗器(上海科导超声仪器有2.3单

8、因素试验在超声温度45～55℃、超声功率200W收稿日期:2016-04-11基金项目:江苏省丹阳市高层次创新创业人才引进项目(2015)作者简介:何月秋(1975—)，女，副教授，从事植物资源保护教学与研究。Tel:1