hplcdadesims鉴定茯苓中的三萜成分

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1、3．2流动相中甲醇浓度的改变对各成分的色谱行为具有显著的影响，甲醇浓度增高时，各成分的保留时间tR显著缩短；反之，则明显延长。参考文献[1]张勇忠，郑晓珂、冯卫生等镇痛汤活性成分的研究中草药2002，33(2)，106—109[2]金国章，胥彬．延胡索的药理研究I．延胡索甲、乙和丑素和癸素的镇痛作用生理学报，1957；2112]：150—157[3]唐希灿，金国章，胥彬．延胡索的药理研究．IX．延胡索丑索和癸素的中枢神经系统作用生理学报，1962；25(2)：143—148[4]朱任宏，何林兴，陈女燕．中国延胡索

2、之研究I浙江东阳延胡索中的植物碱．化学学报，1962；28(4)：195一199[5]王浴铭，朱风云，汪茂田等咽喉草化学成分的研究．中草药1987，18(10)，434—435HPLC／DAD／ESI—MS鉴定茯苓中的三萜成分于能江，郭继芬，赵毅民(军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)HPLC指纹图谱可以较全面的说明药用植物(或中药)中的化学成分，因而比现有的普遍以一两个主要成分的定性和定量作为质量标准的方法更能保证中药的质量稳定和安全。而二极管阵列检测(DAD)和质谱(MS)检测技术与HPLC联用，

3、可以在化学成分分离的同时，在线提供每个谱峰的紫外图谱和质谱信息。在多数情况下，通过对比文献数据或与标准化合物对照可以鉴定各谱峰的化学成分结构L1j。因而，HPLC／DAD／MS联用技术可以为得到谱峰化学成分结构基本明确的HPLC指纹图谱提供有效帮助。茯苓(PorioCOCOS(Sehw．)wolf．)具有渗湿利尿、和胃健脾及安神功效。主要化学成分为多糖、三萜、脂肪酸、甾醇及酶等【2J。三萜类成分具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节、止吐和胰岛素作用增强等作用L3J。中外学者对其进行了大量研究，分离得到了大量化合物。其结构类

4、型分为两类：羊毛甾烷三萜烯型(见图2)和3，4一开环一羊毛甾烷三萜烯型(仅存在于茯苓皮中)。羊毛甾烷三萜烯型从环内双键上可以区分为两类：8位双键型和7，9(11)异环双键型，紫外最大吸收波长分别为末端吸收和242nm。其余结构中的变化为：(a)3位碳上有羟基、乙酰氧基或酮基取代及存在差向异构；(b)边链上的双键为24(25)位双键或24(31)位双键；(c)环上16位及其边链上有无羟基或乙酰氧基取代。从以上结构分析中可以看出，只要具备紫外图谱和一定的质谱信息，就可以基本确定茯苓中三萜化学成分的结构。因此，本文探讨

5、了利用HPLC／DAD／MS联用技术鉴定茯苓中三萜化学成分的方法。1材料与方法11仪器与药材美国应用生物系统公司API3000三级四极杆串联质谱仪，配有Turbolonsprav源以及Analyst1．1数据处理系统。Agilent1100高效液相色谱系统，配有四元梯度泵，DAD紫外检测器，自动进样器。茯苓(Poria㈣(Schw．)Wolf．)购自北京同仁堂药店，由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星教授鉴定。乙腈为色谱醇，水为二次重蒸馏水，其它试剂为分析纯。1．2实验方法1．2．1色谱条件色谱柱：HYPERSI

6、LC18柱(4．6ram×250ram，5ttm)；流动相：乙腈一水[(50：50)(0—48min)一(65：35)(48—68min)一(75：25)(68—95rain)](0．1％乙酸)；柱温：25℃；流速：1．0mL／min。1．2．2质谱条件电喷雾离子化源，负离子检测(离子源喷射电压：一3800V；离子源温度为3000C)，正离子检测(离子源喷射电压：+4000V；离子源温度：300℃)。1．2．3样品制备茯苓粉末109，加甲醇60mL，超声波提取20rain，过滤，滤渣再加人甲醇60mL超声波提取2

7、0rain，过滤，合并滤液，减压浓缩后，氮气吹干，得到干燥提取物0．12499，提取物用少量甲醇溶解后，过SephadexLH一20柱(CH30H)，根据薄层层析显示收集流份，浓缩干燥后，得到0．09939样品，精密称取20620．2mg,用甲醇定容至2mL，0．45pm滤膜过滤后进行分析。2结果2．1HPLC—DAD分析结果茯苓三萜的8位双键型和7，9(11)异环双键型的紫外最大吸收峰分别为末端吸收和242nm，因此，DAD紫外检测波长选用210rim和242nm，所得色谱图见图1。各色谱峰的紫外吸收特征见表1

8、。表1HPLC谱图中各色谱峰的保留时间、紫外吸收、负离子和正离子扫描质谱信息以及经鉴定的化学成分结构NOtH(min)UV(rim)MS(neg)nl／zMS(pos．)m／zStrue‘注‰最犬吸收玻长；b与色谮峰是否一致段有确定；12．数字代号为图2中的箔构代号；d273—0一苯甲酰基一16a一羟基去氢齿孔酸(3—0一benzoyldehydrofⅢ10sicacid