茯苓皮中三萜类化学成分的分离纯化、结构鉴定及茯苓药材指纹图谱的研究

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1、湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：痊码训≥年弓月刁日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部

2、份内容，可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文；学；皎可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密论文在解密后遵守此规定)黻储张拥导师张；驰噜≯J；年弓月目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯III前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1第一章茯苓皮中三萜类化合物提取分离与结构鉴定⋯⋯⋯⋯⋯一2第一

3、节实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一2第二节结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一6第三节分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第二章不同药用部位茯苓UPLC—UV-MS指纹图谱比较研究⋯．25第一节仪器和试药⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第二节方法和结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27第三节分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37第三章总结与创新⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一39文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。40第一节茯苓的研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40第二节HPLC—MS联用技术在中药材指纹图谱研究中的应用⋯．55参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．58附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67茯苓皮中三萜类化学成分的分离纯化、结构鉴定及茯苓药材指纹图谱的研究中文摘要茯苓为多孔菌科真菌茯苓Po_riaCOCOS(Schw．)Wolf的干燥菌核，是我国珍贵的传统中药材，在我国已有两千多年的药用历史，常与其他中药方剂配伍使用，作为利尿、镇静、滋补的良药。现代药

5、理研究表明，三萜类成分是茯苓主要的药效成分之一。茯苓皮作为茯苓菌核的干燥外皮，在加工过程中，以往常常被当成废料处理，然而近年研究发现茯苓皮中所含有的三萜类成分不仅丰富，还具有一些特征性成分。故本文以茯苓皮为研究对象，对其三萜类成分进行提取、分离、纯化与鉴定；并利用UPLC-UV-MS的方法，对收集到的不同药用部位不同产地的的茯苓药材进行指纹图谱比较研究。本论文采用碱溶酸析法，将茯苓皮药材用甲醇回流提取，提取液浓缩至浸膏状，加水混悬后，用乙醚萃取，得到的乙醚部分分别用饱和的NaHCO，水溶液和5％的NaOH水溶液萃取，然后两部分的萃取物均用6mol／LHCl酸化，

6、经乙醚萃取后，得到FractionA(饱和NaHCO。层)和FractionB(5％的NaOH层)两个部位。利用柱色谱法、薄层色谱法、制备高效液相色谱法和核磁共振等技术对FractionA(饱和的NaHCO。层)部位中所含三萜类成分进行分离纯化和鉴定，共获得8个单体化合物，其中5个化合物的结构经1H-NMR和”C-NMR核磁共振检测后结构已确定，分别为：茯苓酸A(ForicoicacidA)、茯苓酸B(PoricoicaCidB)、茯苓酸AM(PoricoicaCidAM)、茯苓酸G(PoricoicacidG)、去氢土莫酸(Dehydrotumulosicac

7、id)；另外3个化合物的结构尚未确定，经uPLc—uV．Ms鉴定，纯度和分子量已知。该实验为进一步研究茯苓的药效物质基础，特别是茯苓皮中所含有特征性3，4一开环一羊毛甾类三萜成分提供了参考和依据。本实验利用液质联用的方法建立了茯苓药材的UPLC—uV-Ms指纹图谱，共标定了22个色谱峰，其中9个峰共有且含量较高。通过与实验室自制的6个单体化合物[去氢土莫酸(Dehydrotumulosicacid)、茯苓酸A(PoricoicacidA)、茯苓酸B(PoricoiCacidB)、茯苓酸AM(PoricoicacidAM)、茯苓酸(Pachymicacid)、去氢

8、茯苓酸(Dehtdrap