高速逆流色谱快速分离茯苓皮中的高纯度茯苓酸a

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1、万方数据第3l卷第2期2009年4月大连医科大学学报JournalofDalianMedicalUniversityVm．3lNO．2Apr．2009高速逆流色谱快速分离茯苓皮中的高纯度茯苓酸A王艳，汤新强(大连医科大学附属第一医院药剂科，辽宁大连116011)摘要：[目的]建立利用高速逆流色谱法高效、快速分离茯苓皮中茯芩酸A的新方法。[方法]茯苓皮的乙醇提取物经大孔吸附树脂柱初分后，直接进行高速逆流色谱分离，所用两相溶剂体系为正己烷一乙酸乙酯一正丁醇一水(1：1：1．2：0．8，v／v)，流速1．5mL／IIIi

2、n，转速800r／rain．检测波长254nm，所得产物的纯度经HPLC检测，结构经红外光谱(IR)，紫外光谱(uv)，质谱(Ms)和核磁共振谱(NMR)鉴定。[结果]从200mg茯苓皮粗提物中可得到76mg纯度高于98％的茯苓酸A，分离时间短于5h。[结论]该方法简便、快速，适合于茯苓皮中高纯度茯苓酸A的分离制备。关键词：HSCCC；茯苓皮；茯苓酸A：HPl。C中图分类号：R284．2文献标志码：A文章编号：1671—7295(2009)02—0227—04茯苓是中国著名的传统中药，为多菌科真菌茯苓(PofiaC

3、OCOS)。茯苓皮为茯苓菌核的黑色外皮PoriaCOCOS(Schw．)Wolf．[PavhymaCOCOSFr．]，首载于《本草纲日》，味甘淡，性平，是一味常用的利水消肿药，主要含多糖，三萜酸类，等有效成分¨'2J。历来主要把茯苓人药，而对茯苓皮的研究很少，通常当废物弃去，造成很大的资源浪费。高速逆流色谱(High—speedcounter—currentchromatography，HSCCC)是在20世纪80年代南Yoichiroho教授首先研究和发展起来的一种无同相载体的连续液一液分配色谱技术[35

4、，目前

5、在天然产物的分离制备中应用广泛。本文利用高速逆流色谱对茯苓皮中的化学成分进行分离，最终得到纯度高于98％的茯苓酸A。该方法分离时间短，分离效率高、产物纯度好，是制备茯苓酸A的有效方法。目前，还未见关于使用HSC—CC分离制备茯苓酸A的研究报道。1试剂与仪器1．1药材与试剂茯苓皮购于云南千草源药业有限公司，经大连医科大学天然药物化学教研室刁云鹏博士鉴定为茯苓菌核(PoriaCOCOS)的外表皮(PoriaCOCOS(Schw．)Wolf．[PavhymaCOCOSFr．])。正己烷、乙酸乙酯和甲醇均为分析纯试剂(天津

6、科密欧化学试剂开发中收稿日期：2008—11—26；修回日期：2009一01—18作者简介：王艳(1968一)，山东龙口人，副主任药师，硕士。心)，乙腈、甲醇为色谱纯试剂(TEDIA，USA)，95％医用酒精(盘锦天源药业有限公司)，自制舣蒸水。1．2仪器设备TBE一300A高速逆流色谱仪(上海同田牛化技术有限公司)、进样罔20mL、8823B一紫外枪测仪(北京市新技术应用研究所)、TBP一50A恒压恒流微量泵(上海同田生化技术有限公司)、HXl050恒温循环器(北京博医康实验仪器有限公司)、N2000色谱数据工作

7、站(浙江大学智达信息T程有限公司)；Agilentl200HPLC系统包括G1322A真空脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1314B可变波长紫外检测器、ChemstationT作站(Agilent，USA)：U3010紫；,1-／可见分光光度计(Hitachi，Ja—pan)：Perkin—Elmer577红外分光光度计，KBr压片：Bruker一400型核磁共振仪，TMS为内标；APl3200型质谱仪(美国应用生物系统公司)；D101大孔树脂(天津农药厂)，SENCO5L旋转蒸发仪(上海申生

8、科技有限公司)，DZF一6021真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)，98—1一B电热套(上海申生科技有限公司)。2方法与结果2．1两相溶剂系统的制备本研究采用正己烷一乙酸乙酯一甲醇一水(1：1：1．2：0．8，v／v)的溶剂系统。将正己烷、乙酸万方数据228大连医科大学学报第3l卷乙酯、甲醇、蒸馏水按体积比(1：1：1．2：0．8)倒入分液漏斗内混合，充分振摇，静置分层，使用前分取上下相，上相作为同定相，下相作为流动相，分别超声脱气30min，冷却至室温，备用。2．2样品溶液的制备取十燥的茯苓皮0．5kg，粉碎后用

9、70％乙醇回流提取2次，4h／次。合并提取液，减压同收提取物得浸膏800mL，浓缩温度为60。C。将浸膏进行D101大孔树脂柱(80cmx6cm)层析，依次用水，60％、70％、80％、95％乙醇各2000mL梯度洗脱，接收各浓度的乙醇洗脱液，并对其进行HPLC分析，结果显示70％流份适于用高速逆流色谱法进行分离纯化，将该流份减压浓缩、真空干燥，得淡黄色粉末