茯苓多糖提取纯化及指纹图谱研究

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1、湖南大学硕士学位论文茯苓多糖提取纯化及指纹图谱研究姓名：屈贺幂申请学位级别：硕士专业：@指导教师：徐伟箭;夏新年20070709硕士学位论文摘要茯苓是一种担子菌纲非褶菌目多孔菌科的真菌，外形有菌丝体和菌核两部分。其菌核寄生于红松、马尾松根部。茯苓还是中国和一些亚洲国家的传统中药材，其应用至今已有2000多年历史。在我国200多个传统中医精华方剂中，含有茯苓的就占了1/5，可以说是中药常用成分。而茯苓多糖为茯苓的主要成分，具有抗炎、抗肿瘤和抗衰老等多种活性。本论文主要研究其水溶性多糖的提取工艺、分离纯化及质量控制方法。在提取工艺研究中，主要考虑

2、了浸提水溶液温度、料水比和浸提时间对多糖得率的影响，首先进行单因素试验，确定单因素的水平范围，并在此基础上采用正交实验进行分析，以获得最佳的粗多糖浸提工艺参数。然后采用中心组合设计进行放大试验，经统计回归分析得到茯苓粗多糖的优化提取工艺参数：料水比为1:9.4，浸提温度90℃，沉淀时酒精浓度70%，提取时间7.4小时左右。分离纯化从醇沉物入手。首先对比研究了Sevag法、木瓜蛋白酶法、及二者结合脱除蛋白质的效果。试验结果表明：综合考虑蛋白质的脱除效果和多糖的损失，三种方法中酶法结合Sevag法较优，蛋白质脱除45.5%，多糖损失34.3%。然

3、后利用超滤法对醇沉得到的粗多糖进行了进一步分离纯化，得到纯度较高的水溶性茯苓多糖。为对茯苓多糖的质量进行有效的控制，本文利用超滤法和高效液相色谱法，对三种不同产地的茯苓（广西茯苓、云南茯苓、湖南茯苓）进行了研究，建立了基于多糖的二元指纹图谱的工艺流程和分析方法。本方法首先对提取得到的多糖用三氟乙酸水解，随后由水解得到的单糖通过PMP进行衍生，然后由高效液相色谱分析得到基于茯苓多糖的指纹图谱，最后利用夹角余弦法计算相似性。以广西茯苓为基准计算时，湖南和云南茯苓与其相似性分别为0.9190，0.7400。该计算结果表明，基于碳水化合物信息融合的多

4、元指纹图谱方法可以有效的对不同产地的茯苓进行筛选，是一种有效的中药多糖质量控制的方法。关键词：茯苓；多糖；超滤技术；二元指纹图谱；高效液相色谱II茯苓多糖提取、纯化及指纹图谱研究AbstractThisthesisismainlydedicatedtoresearchintheseparation,purification,analysisandqualitycontrolofpolysacchridesfromawidelyusedChineseherbaldrug,poriacocosorFu-ling.Fu-Ling,whichgrow

5、sontherootsofPinetrees,isthescledermaofPoriaCocos(Schw.)Wolf.Basedonthemajorpharmacologicaleffets，Fu-Lingisoneofthemajoringredientsofnearly40TCMs，whichhavebeenusedformorethanthousandsofyearsinChinesehistory.Itspolysacchrideshavemanybiologicalactivities,suchasanti-tumor.Thee

6、fficiencyofclassicextractionmethodforpolysacchridesbyhotwaterwasstudied.Theinfluenceofextractiontemperature,waterratio,extractiontimeandalcoholconcentrationontheyieldofsugarsfromFu-lingwasinspectedintheprocessofextraction.Theoptimalconditionwaschosenfortheextractionofpolysa

7、ccharidefromFu-ling(condition:waterratio1:9.4,temperature90℃，time7hours，precipatingalcoholconcentration70%).Intheprocessofpurificationforrudesugars，theefficiencyofdeproteiningbysevagmethod，papainmethodandsevagmethodcombinedwithpapainwasstudied.Theresultshowedthatsevagmethod

8、combinedwithpapainwasbestforisolatingproteinfromsugars.Ultrafiltrationmethodwasals