低分子量肝素对实验性小鼠结肠炎的治疗作用及机理初探

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1、南方医科大学硕士学位论文低分子量肝素对实验性小鼠结肠炎的治疗作用及机理初探姓名：王显飞申请学位级别：硕士专业：消化内科学指导教师：陈村龙;陈烨20080510硕士学位论文低分子量肝素对实验性小鼠结肠炎的治疗作用及机理初探硕士研究生：王显飞指导导师：陈村龙教授陈烨副教授摘要第一部分急性结肠炎慢性化小鼠模型的建立背景：溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)是影响人类消化系统主要的慢性炎症性肠病(IBD)。其病因学不明，但是近年来，对人尤其是炎症性肠病相关的动物模型的流行病学及遗传学研究表明：遗传易感性因素及由肠道环

2、境中微生物因素驱动的免疫反应相互作用导致炎性疾病的发生及其慢性化过程。几种动物模型已经被开发出来去研究炎症性肠病的病因，但是都不理想。当选择适当，这些模型可用于研究炎性疾病的病理生理机制，同时它们在临床前期测试新豹治疗策略中也具有一定的价值。因为炎症反应起病快，两且病程简单，所以用化学试剂诱导的肠道炎症模型属于最常见的炎症性肠病模型。尽管这些模型像其他模型一样有缺陷，但是它们在～些重要的免疫及组织病理学方面与人类炎症性肠病的表现相似。用化学试剂葡聚糖硫酸钠(DSS)能诱导出肠道炎症。改变DSS的浓度和作用时闻可

3、建立适当的结肠炎模型，对于进一步研究其病因和发病机制具有重要意义。隧煦：建立急性缝肠炎慢性他的小鼠模型，并探讨其病理学特征。方法：48只C57BL／6小鼠随机分为模型组(n=24)和正常对照组(n：24)。模型组自由饮用3％DSS溶液，5d后改饮用蒸馏水3周。正常对照组饮用蒸馏中文摘要承26d。每圜行疾病活动指数(DA王)评分。于实验第5、12、19、26d分别处死6只小鼠，彳亍结肠大体形态观察、组织病理学评分和炎症评分。结果：造模第5d，模型组小鼠均出现腹泻、便盘、一体质量减轻等症状，光学显微镜下可见结肠多灶

4、性浅溃疡，上皮缺失或少许残留，隐窝破坏，杯状细胞减少，以中健粒细胞为主的炎性细胞浸润黏膜和黏膜下层。改饮用蒸馏水3周后，小鼠体质量恢复，腹泻减轻，血便等症状消失，但镜下仍见灶性小溃疡，伴上皮不规则褥生和数量较多的炎性细胞浸润。急、慢性期肠道瘸变均以远段结肠为重。结论：单个循环饮用3％DSS可诱导C57BL／6小鼠建立与人类临床和病理表现相似的急、慢性结肠炎模型，为进一步研究结肠炎提供了新的模型系统。第二部分低分子量肝素对实验性小鼠结肠炎的治疗作用及机理初探背景：肝紊具有抗凝及抗炎的双重作用，但是其在动物模型及人

5、类疾病中的抗炎机制仍不明确。在炎症性肠道疾病中，粘膜缺损后重建的正常愈合过程可能被炎症所阻断。这可能是由于生长因子丢失或细胞黏附分子丢失，或者两者同时丢失而降低了愈合的几率。肝素治疗能促进溃疡性结肠炎的愈合。Day等报道syndecan．1作为最主要的上皮syndecan，通过作为成纤维细胞生长因子2(FGF．2)的复合受体起作用，有助于愈合15J。在炎症性肠病患者中，发现其修复上皮中的syndecan．1免疫染色显著减少。体外实验表明，胃肠道上皮细胞硫酸乙酰肝素经酶去除后，对FGF．2的增殖反应降低。肝素能使

6、syndecan．1对FGF．2反应完全修复。炎症性肠瘸另一个特点是肠道通透性改变和大量的中性粒细胞从上皮细胞渗出。上皮细胞表达许多细胞因子及细胞因子受体，面趋化因子比如白细胞三烯B4，血小板活化因子及N-甲酰肽能加速中性粒细胞的跨膜迁移。Furuta等证实在缺氧情况下诱导的粘膜损伤中，细胞因子与上皮表西及活化多形核白细胞ll硕士学饭论文(P涨)相关。他们发现上皮缺氧诱导了上皮表面自细胞介素8(IL．8)及HSPG基底膜蛋白多糖的表达，以及其它的细胞表面的HSPGs表达。而缺氧诱导的IL．8表达在翳素酶Ⅲ治疗薏

7、显著下降。源子肝素及硫酸乙酰肝素的双糖能调节肠粘膜上皮细胞分泌促炎症反应介质。由此推测在炎症性肠病中出现的syndeean一1表达交纯经细胞因子活纯修饰焉导致中性粒细胞黏附及渗出。目的：通过观察低分子量肝素对DSS诱发的小鼠结肠炎结肠粘膜中自细胞介素l毛．113、IL一10、Sydecan-1mRNA以及Sydecan-1蛋彝表达的影响，在一定程度上阐明肝素抗炎的分子机制。方法：1、54只C57BL／6小鼠随机分为模型组(n=18)、治疗组(舻18)和正常对照组(n-18)。模型组和治疗组自由饮焉3％DSS溶液

8、，5d后改饮用蒸馏水3周。正常对照组饮用蒸馏水26d。治疗组每天1次皮下注射低分子量肝索(克赛)5lag／dx鼠，共20天；模型组及正常对照组每天1次皮下注射等量的生理盐水。2、每目行疾病活动指数(DAl)评分。于实验第5、12、19、26d分别处死6只小鼠，行结肠大体形态观察、组织病理学评分和炎症评分。3、用RT．PCR检测小鼠结肠粘膜中玩．1t3、IL．10及Sydecan．1mR