当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究

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1、当sinensis(Oliv．)Diels的干燥根⋯。当归根人药，有补血活血、酸、30％过氧化氢、i氯乙酸(TCA)、磷酸缓冲液(pH值为调调经止痛、润肠通便和调控免疫活性的功效【21。临床用量7．40，pH值为6．60)(PBS)、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、查大，出口量大，主产甘肃岷县、渭源、陇西、宕昌等地I。其氢氧化钠、三氯化铁、铁氰化钾等试剂均为分析纯；试验用研主要成分有挥发油、多糖、阿魏酸等}41，此外还含少量钾、水为三蒸水，所用仪器均经自来水、三蒸水清洗备用。究钙、镁、锌、硒等微量元素。近年来，对当归的深度开发在1．3主要仪器医药、保健品和化妆品领域

2、取得了一定成效⋯。当归的主GB204电子天平：梅特勒一托利多仪器(上海)有限公要功能成分一直被认为是挥发油和阿魏酸，近年来国内外司；RE一52C型旋转蒸发仪：巩义市英峪予华仪器厂；医学专家研究发现当归还有抗缺氧、抗癌、康肤美容、补SHZ—D(1lI)循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限责任公血活血、抑菌、抗动脉硬化作用等I51。司；DK一98一Ⅱ型电热恒温水浴锅：天津市泰斯特仪器有限黄酮是广泛存在于自然界的一大类化合物，存在于植公司；WFJ一2100型分光光度计：尤尼柯(上海)仪器有限公物的所有部分，包括根、心材、树皮、叶、果实和花中。其在司；Lambda系列紫外

3、／可见分光光度计：美国PerkinElmer植物体内大部分与糖结合成苷类，小部分以游离态(苷元)公司；800型离心沉淀器：上海手术器械十厂；YLD一2100的形式存在【。黄酮类化合物大多具有颜色，在生理方面电热恒温鼓风干燥箱：上海琅歼实验设备有限公司。具有降低心肌耗氧量、增加冠状动脉和脑血管血流量、增1．4黄酮含量测定原理及鉴定方法加机体免疫功能、抗心律失常、软化血管、降血糖、降血1．4．1测定原理黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮脂、清除机体自由基和抗衰老等作用I7I。笔者等以甘肃陇醇苷两大部分。在黄酮类化合物溶液中加入铝离子试剂南当归为对象，考察其提取工艺及抗

4、氧化性，为当归的进后，黄酮类化合物中的酚羟基与Al生成络合物，控制适一步开发利用提供科学依据。宜的pH值，所生成的络合物在可见区能获得特征吸收1材料与方法峰，其质量浓度与吸光度符合朗伯一比耳定律，可以定量1．1原料及处理方法测定『8]。当归：采自甘肃陇南。将当归根经自来水、蒸馏水洗1．4．2金属盐类试剂的络合反应盐酸一锌粉反应：在净，烘干，粉碎过60目筛，备用。样品液中加入少量锌粉，再滴加1-2滴浓盐酸，在沸水中1-2主要试剂加热3min，观察反应结果。铝盐反应：在样品液中滴加邻苯三酚：美国Sigma公司；Tris：加拿大BioBasic公10％A1C1，溶液，

5、观察反应结果。浓硫酸反应：在样品液中滴加少量浓H2SO溶液，观察反应结果。硝酸铅反应：在样品液中滴加10％Pb(NO，)，溶液，观察反应结果。氢氧化钠反应：在样品液中滴加4％NaOH溶液，观察反应结果。1．4．3单因素试验分别以提取温度、乙醇浓度、提取时间、料液比为影响因素，设置4个因素的不同水平，以确定相关因素对当归提取液中总黄酮含量的影响。捕捉·OH，并产生有色物质，该有色物质在510rim下有最大吸收，故通过测定A。值可以定量判断·OH的清除程度，并可以估算出·OH的清除率。取不同量一定浓度的提取液，加入9．O0mmol／LFeSO41．O0mL，9．O0

6、mmo]JL水杨酸一乙醇溶液1．O0mL，再加8．80mmol／LH：01．O0mL，用蒸馏水补至5．00mL，于37℃下反应30min，以蒸馏水作参比测定A。值(A)，以9mmol／LFeSO41．O0mL，9．O0mmol／L水杨酸一乙醇溶液1．O0mL，移取一定量提取液，用蒸馏水补至5．O0mL，于37℃下反应30rain作为本底吸收值(A蚰)，以9mmo1]LFeSO1．O0mL，9．O0mmol／L水杨酸一乙醇溶液1．O0mL，蒸馏水1．O0mL，8．80mmo1]LH2021．O0mL，用蒸馏水补至5．O0mL，于37℃下反应30rain作为空白(A

7、0)，均测定其A，。值。按以下公式计算自由基清除率(C)：C(％)：Ao-(Ax-Axo)×100A．01．6．2提取液对超氧阴离子的抑制作用I111在碱性条件下(pH值8．20)邻苯三酚发生自氧化反应，生成02_·和有色中间产物，该有色产物在322nm处有一特征吸收峰。当加入0：一·清除剂时，0一·的生成被抑制，邻苯三酚自氧化速率受阻，溶液在322nm处吸收减弱，故通过测定A值可以推测提取物对02-·的清除作用，并比较不同提取物添加量对02-·清除作用的相对大小。取3支10mL比色管，各加入pH值8．20的Tris—HCI溶液2．O0mL，再依次分别加入0．O

8、0、0．50mL一定1．