当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究

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1、当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究当sinensis(Oliv.)Diels的干燥根….当归根人药,有补血活血,调经止痛,润肠通便和调控免疫活性的功效【21.临床用量大,出口量大,主产甘肃岷县,渭源,陇西,宕昌等地I.其主要成分有挥发油,多糖,阿魏酸等}41,此外还含少量钾,钙,镁,锌,硒等微量元素.近年来,对当归的深度开发在医

2、药,保健品和化妆品领域取得了一定成效….当归的主要功能成分一直被认为是挥发油和阿魏酸,近年来国内外医学专家研究发现当归还有抗缺氧,抗癌,康肤美容,补血活血,抑菌,抗动脉硬化作用等I51.黄酮是广泛存在于自然界的一大类化合物,存在于植物的所有部分,包括根,心材,树皮,叶,果实和花中.其在植物体内大部分与糖结合成苷类,小部分以游离态(苷元)的形式存在【.黄酮类化合物大多具有颜色,在生理方面具有降低心肌耗氧量,增加冠状动脉和脑血管血流量,增加机体免疫功能,抗心律失常,软化血管,降血糖,降血脂,清除机体自由基和抗衰老等作用I7I.笔者等以甘肃陇南当归为对象,考察其提取工艺及抗氧化性,为

3、当归的进一步开发利用提供科学依据.1材料与方法1.1原料及处理方法当归:采自甘肃陇南.将当归根经自来水,蒸馏水洗净,烘干,粉碎过60目筛,备用.1-2主要试剂邻苯三酚:美国Sigma公司;Tris:加拿大BioBasic公酸,30%过氧化氢,i氯乙酸(TCA),磷酸缓冲液(pH值为7.40,pH值为6.60)(PBS),无水乙醇,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠,三氯化铁,铁氰化钾等试剂均为分析纯;试验用水为三蒸水,所用仪器均经自来水,三蒸水清洗备用.1.3主要仪器GB204电子天平:梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司;RE一52C型旋转蒸发仪:巩义市英峪予华仪器厂;SHZ—D(1l

4、I)循环水式真空泵:巩义市予华仪器有限责任公司;DK一98一Ⅱ型电热恒温水浴锅:天津市泰斯特仪器有限公司;WFJ一2100型分光光度计:尤尼柯(上海)仪器有限公司;Lambda系列紫外/可见分光光度计:美国PerkinElmer公司;800型离心沉淀器:上海手术器械十厂;YLD一2100电热恒温鼓风干燥箱:上海琅歼实验设备有限公司.1.4黄酮含量测定原理及鉴定方法1.4.1测定原理黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮醇苷两大部分.在黄酮类化合物溶液中加入铝离子试剂后,黄酮类化合物中的酚羟基与Al生成络合物,控制适宜的pH值,所生成的络合物在可见区能获得特征吸收峰,其质量浓度与吸光度

5、符合朗伯一比耳定律,可以定量测定『8].1.4.2金属盐类试剂的络合反应盐酸一锌粉反应:在样品液中加入少量锌粉,再滴加1-2滴浓盐酸,在沸水中加热3min,观察反应结果.铝盐反应:在样品液中滴加10%A1C1,溶液,观察反应结果.浓硫酸反应:在样品液中滴加少量浓H2SO溶液,观察反应结果.硝酸铅反应:在样品液中滴加10%Pb(NO,),溶液,观察反应结果.氢氧化钠反应:在样品液中滴加4%NaOH溶液,观察反应结果.1.4.3单因素试验分别以提取温度,乙醇浓度,提取时间,料液比为影响因素,设置4个因素的不同水平,以确定相关因素对当归提取液中总黄酮含量的影响.调查研究1.5.2标准

6、曲线的绘制1.5.2.1芦丁标准溶液的配制准确称取105oC常压干燥至恒重的芦丁标准品10.0mg,用少量75%乙醇加热溶解,待冷却后转移至50mL的容量瓶中,定容至刻度,充分混匀.芦丁标准品的浓度为0.2000rag/mE,备用.1.5.2.2测定波长的选择按上述方法制备标准溶液,以不加标准溶液的相应溶液为空白,在波长400—760nm进行连续扫描.结果在波长509nm处有最大吸收,因此选择509nm为测定波长.1.5.2.3标准曲线的绘制精确吸取芦丁标准溶液0.O0,0.50,1.O0,1.50,2.O0,2.50,3.O0,3.50mL,分别置于10mL的具塞试管中,先加

7、5%亚硝酸钠溶液0.40mL,摇匀,静置6min;再加10%硝酸铝溶液0.40mL,摇匀,静置5rain;最后加入4%氢氧化钠4.O0mL,用75%乙醇定容,摇匀,静置15rain,以芦丁试剂空白作参比,用分光光度计于509nrfl处测定吸光度.1.5.3回收率试验精密量取一定量在最佳提取工艺条件下的当归总黄酮提取液,加入0.2000mg/mL芦丁标准液1.O0mL,最后定容至10mL.测量吸光度,计算黄酮回收率.1.5.4精密度试验根据正交试验的分析结果,依照最佳提取工艺进行提取,对当归样