反相高效液相色谱检测丹参药材中4种丹参酮的含量

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1、第$$卷分析化学(SFTUB9@2U@F)!研究简报第$期!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!#%%(年$月:V./MOMWKXL/NHKY2/NHZ[.DNH:VM,.O[LZ$((4$(5反相高效液相色谱检测丹参药材中!种丹参酮的含量#"#"""张!鉴!王!兰!袁成凌!王相勤!余增亮"#(中国科学院离子束生物工程学重点实验室,合肥#$%%$")!!(安徽中医学院,合肥#$%%##)摘!要!建立了测定丹参药材中&种丹参酮含量的反相高效液相色谱法,色谱条件:流动相为水(含%’()三乙胺)

2、*甲醇*四氢呋喃(&(+((+(,!"!"!),流速为",-+,./;012检测波长#(&/,;&种成分丹参酮!、丹参酮"2、隐丹参酮和二氢丹参酮的加样回收率在3(’")4"%"’#)之间,线性范围为%’%54##6。该方法准确,稳定,重现性好。根据该色谱条件,测定了不同产地的丹参药材,结果表明:该色谱方法准确检测了生药中&种丹参酮的含量,适合于丹参药材的质量控制。关键词!反相高效液相色谱,丹参,丹参酮"#引##言丹参是鼠尾草属植物丹参(#$%&’$()’%*’+,,-’.$,$/’0)的根,酯溶性

3、成分丹参酮类化合物为其主要药效成分,具有扩张冠状动脉,增加血流量的作用,对冠心病、心绞痛、心肌梗塞和心肌损害有一定疗["4&][#]效。丹参原药材的品质决定了丹参药物的活性,药材质量的差异给成药生产及临床疗效控制带["]来的不确定性不容忽视。药典中丹参酮"2为丹参检测中的质控指标,而最近多篇文献报道了丹参[(,8][7,5]酮!、隐丹参酮及二氢丹参酮新的药理和药效,因此也应对这$种丹参酮类物质进行定量的分[3]析,才可以较为完整的表达丹参药材的质量。李迎春等使用90-:检测丹参及其提取物中$种丹参[

4、"%]酮的含量;闫豫君等使用;0*90-:法测定了丹参中丹参酮"2和隐丹参酮的含量。而对于同时测定丹参中丹参酮"2,丹参酮!,隐丹参酮和二氢丹参酮等&种丹参酮类物质的检测没有报道,为此,研究了&种丹参酮的;0*90-:检测方法,并对多个产地的丹参药材中丹参酮含量进行了研究。$#实验部分$’"#仪器与试剂高效液相色谱仪(日本岛津公司);-:*"%2<=0泵;>:-*"%2=0系统控制器;1?@*"&2脱气机;:B-*"%21=0自动进样器;>01*C"%2=0检测器;:-2>

5、>*=0工作站8’"#>0"(日本岛津公司)。丹参药材从多个药材产地采集,切为%’(D,的小段在&%E烘干至恒重,粉碎后过%’"5,,粒径筛,放入干燥器备用;对照品丹参酮"2、丹参酮!、隐丹参酮和二氢丹参酮购自中国药品生物制品鉴定所。甲醇、四氢呋喃、三乙胺为色谱纯(购自CF;:G公司);C.HH.*I纯水;其它试剂为分析纯(购自上海试剂公司),流动相经%’&(#,C.HH.JKLM滤膜过滤。$’$#实验方法$’$’"#色谱分析条件!色谱柱:GLK,NO.HG;"%%*(:"(5"(%,,P&’8,,

6、,(#,),柱温:$%E,流动相:水(含%’()三乙胺)*甲醇*四氢呋喃(&(+((+(,!"!"!),流速:",-+,./。定量波长:#(&/,。$’$’$#标准曲线#称取&种丹参酮标样各#’(,6,溶于#(,-甲醇中配成丹参酮浓度为%’"6+-的标样储备液,置于Q#%E冰箱备用。取上述混合标样储备液",-,用色谱级甲醇配成含&种丹参酮为%R%&6+-工作浓度的标准溶液,经%R&(#,的滤膜过滤后分别进样#、(、"%、#%、$%、&%和(%#-,以色谱峰面积为纵坐标1,进样量(#6)为横坐标,绘制

7、标准曲线。&种丹参酮的线性范围在%’%54##6之间。$’$’%#分析方法的精密度,重现性和回收率实验!取对照品溶液,在测定条件下进样#%#-,重复进样7次,以&种丹参酮的峰面积计算,测定方法的精密度;平行测定样品5份,当日处理&份,隔日处理!#%%$*"#*"%收稿;#%%&*%7*%(接受本文系安徽省“十五”中药产业化重大专项(%"5%$%#7)资助课题万方数据#==1"分析化学第##卷!份,进行方法的日内和日间重现性测定;精密称取已测知含量的"份平行样品,其中#份作为对照,其余#份加入一定量的

8、混合标准品,混匀自然挥干后,测定分析方法的加样回收率。!$"#供试品溶液的制备及分析称取干燥样品粉末#%%&’,置于(%&)具塞试管中,加入(%&)*+,*-,.*+#*+,/+((.(,!"!),!%0水浴,超声提取(1&23,提取液离心后再以同样溶剂量及超声时间提取,次,合并提取液,4,吹干溶剂,将残余物溶解于甲醇,转至(%&)容量瓶中用甲醇定容,样品溶液经%$!1!&滤膜过滤后进样(%!)进行分析,根据保留时间和紫外图进行对比定性,依照标准曲线进行定量;每种药材

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