丹参中丹参酮类物质高效液相色谱检测方法研究

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1、基础与理论·331·丹参中丹参酮类物质高效液相色谱检测方法研究杨世高1，汪维云1，张鉴2(1．安徽农业大学生命科学学院，安徽合肥230036；2．安徽省合肥标品公司，安徽合肥230088)摘要：目的：建立丹参中丹参酮类物质高效液相色谱检测方法。方法：采用液相色谱法检测4种丹参酮(丹参酮Ⅱ。，丹参酮I，隐丹参酮，二氢丹参酮)，用冷浸法提取丹参的脂溶性有效成分，以高效液相色谱法(HPLC)做样品标准曲线，测定丹参酮含量。根据该色谱条件下的标准曲线，测定不同产地的丹参药材，并对4个著名的丹参药材基地种植的丹参中丹参酮ⅡA、丹参

2、酮I、隐丹参酮、二氢丹参酮的含量进行了比较。结果：利用该方法能够准确地测定药材中4种丹参酮的含量，适合于丹参药材的质量检测。结论：不同产地丹参有效成分含量有较大差异：山东1地区产的丹参酮ⅡA、隐丹参酮含量最高，每克药材含量分别为24mg和23．6mg，山西地区的丹参酮类物质含量都较低。关键词：丹参；丹参酮ⅡA；丹参酮I；隐丹参酮；二氢丹参酮}HPLC中药丹参为唇形科植物丹参(Salviamilt—iorrhizaBunge)的干燥根及根茎。是一种祛瘀止痛、清血通经、清心除烦药，用来治疗月经不调、胸腹刺痛、心烦不眠、心绞痛

3、等症[1]。现代药理学研究表明，丹参具有增加冠脉流量，降低心肌兴奋性和传导性，对心肌缺血性损伤产生保护作用，改善微循环、抗血小板聚集和血栓形成，改善学习记忆等作用。丹参酮是丹参中的脂溶性成分，它是一类邻醌型的二萜醌类化合物，其中含量较高的为丹参酮ⅡA、隐丹参酮、参丹酮I、二氢丹参酮I等。最新研究表明，丹参酮类具有很多药理作用，如丹参酮具有改善学习记忆￡z]，对拘束应激引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用[3]，对醛糖还原酶具有较强抑制作用H]，抗氧化活性[5]，丹参酮ⅡA可降低实验性肝纤维化大鼠血清中升高的丙氨酸转氨酶、天

4、门冬氨酸转氨酶及一氧化氮水平和过高的肝组织中通讯作者：汪维云(1962一)，男，博士，博士后，从事天然药物、生物制药方面的教学与科研工作，E-mail：weiyunw@126．cornHyp及丙二醛的含量[6]，丹参酮I可诱导肝星状细胞凋亡[7]，隐丹参酮对选择的人癌细胞系HeLa，HepGz，OVCA融3具有细胞毒活性[8]，还具有防治凝血和恢复血液循环等作用[9]。绝大多数丹参药材及制剂的分析只限于丹参酮ⅡA，而对丹参酮ⅡA、隐丹参酮、二氢丹参酮和丹参酮工4种物质同时分析却很少。本实验研究了4种丹参酮类物质的分离，检

5、测方法。实验中采用乙酸乙酯冷浸的方法从丹参中提取脂溶性有效成分，研究了反相高效液相色谱的检测方法，并对丹参药材及市售含丹参的药品进行了品质研究。l材料1-1样品丹参药材购于山东和山西两不同地区的4种药材；丹参片(500mg／片，丹参酮ⅡA的含量≥0．2mg／片；上海黄海制药有限公司)；丹参胶囊(o．25g／粒，隐丹参酮含量≥19mg／粒；河北兴隆希力药业有限公司)。1．2试剂标准样品丹参酮I、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、二氢丹参酮为市购的标样；HPLC用·332-中医药理论与应用研究甲醇，色谱纯(Merck公司)、乙酸乙酯等。

6、1．3仪器(岛津)高效液相色谱仪；Shimad—zuVP—ODS(150mmX4．6mm，5“m)、SYM—MYTRY色谱柱；UV—VISSPDloAshimadzu检测器；岛津LC一10ATvpshimadzu控制器；sepu3000p工作站等。2方法与结果z．1对照品溶液制备将4种丹参酮标准品放人烘箱，40℃下干燥12h，各称取4种丹参酮1．0mg，放人50ml容量瓶中，无水甲醇定容，配制浓度为0．02mg／ml。2．2供试药材样品制备取丹参药材，剪成0．5cm小段，放人烘箱，40℃下干燥12h后取出，用高速粉碎机粉

7、碎，过100目筛，各取供试药材3g，加到100ml回流瓶中，用25ml乙酸乙酯回流提取，每次30rain，重复提取4次。将溶剂分别蒸干，剩余物质用少量甲醇溶解，转入25ml容量瓶中，甲醇定容，过滤，即得。2．3供试药品溶液制备2．3．1丹参片：取丹参片3g，粉碎，过100目筛，取1．0g，加入100ml回流瓶中，每次用25rIll乙酸乙酯，50℃下回流提取30min，重复操作3次，合并溶液，蒸干，剩余物质用少量甲醇溶解，转入lOnll容量瓶中，甲醇定容，过滤，即得。2．3．2丹参胶囊：取0．02mg，用乙酸乙酯提取3次，

8、每次加入25ml，合并提取液，减压回收溶剂，剩余物质用少量甲醇溶解，转入20ml容量瓶中，甲醇定容，过滤，即得。2．4色谱条件色谱柱ShimadzuVP-ODS(150mm×4．6mm，5“m)；检测器UV—VISSPDl0Ashimadzu；流动相：750ml／L的甲醇水，流速：1．5ml／min；控制器：岛津LC