丹参涂膜剂对肥厚性瘢痕细胞因子tgfβ1、bfgf的影响

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1、万方数据580·论著·!望堕!塑Z二墨Z!!细胞蔓盆壬鱼壅堂筮查(些i!』￡!!!丛!!!坐堡!型2兰Q!Q：堑(Q文章编号：1007—8738(2010)06-0580-03丹参涂膜剂对肥厚性瘢痕细胞因子TGF-既、bFGF的影响曹艳杰1，王福波2(1宁波天一职业技术学院康复教研室，浙江宁波315000；2E海中医药大学解剖学教研窜，上海201203)[摘要]目的：通过丹参涂膜剂用于移植人体肥厚性瘢痕裸鼠模型，以观察对瘢痕内细胞因子TGF-B。和bFGF的影响，探讨丹参活血化瘀中药抗肥厚性瘢痕的作用机制，为临床中医预防和治

2、疗瘢痕用药提供实验依据。方法：制作丹参涂膜剂，用于移植人体肥厚性瘢痕裸鼠模型，免疫组化EnVision法检测细胞因子TGF．13。、bFGF的表达。结果：丹参涂膜剂可促使瘢痕组织内细胞因子TGF—B。的表达明显下降，可增强瘢痕组织内细胞因子bFGF的表达。结论：丹参活血化瘀中药具有抑制瘢痕组织内细胞因子TGF-B。的表达和增强瘢痕组织内细胞因子bFGF的表达，从而具有抑制瘢痕的作用。[关键词】TGF-B，；bFGF；肥厚性瘢痕；丹参[中图分类号]R392．11[文献标识码]B在皮肤创面愈合过程中，细胞因子可直接或间接、单独或

3、协同、同时或不同时作用于炎症细胞和修复细胞Hj，在创伤修复和瘢痕形成过程中发挥着重要的作用。研究瘢痕形成与增生的机理，有效防治瘢痕是医学整形美容领域内的急需解决的难题。目前中医药在临床治疗瘢痕中已经有了很好的发展旧J，但缺少较系统的治疗方法和科学实验依据，所以很有必要进一步深入研究中医中药在抑制瘢痕作用机制。丹参作为一种常用内科脏器抗纤维化药物，可抑制成纤维细胞自分泌TGF—B，L3J，增加局部bFGF浓度，促进细胞凋亡，降低胶原的合成，显示出良好的创伤修复功能。本实验我们采用丹参提取物做成涂膜剂，用于移植人体肥厚性瘢痕裸鼠

4、模型H。6J，通过检测用药后瘢痕组织内的细胞因子TGF—B．和bF—GF含量变化，分析其是否对瘢痕组织内的细胞因子有抑制或促进作用，并探讨其抑制瘢痕作用机制，为临床中医预防和治疗瘢痕用药提供实验依据。1材料和方法1．1材料6—7周龄雄性单纯性T淋巴细胞缺陷裸鼠，SPF级，体质量18—21g左右，由上海中医药大学实验动物中心提供。肥厚性瘢痕标本取自上海市第九人民医院整复外科手术患者。1：50兔抗人TGF．B，多克隆抗体(SantaCruz公司)、1：80兔抗人bFGF多克隆抗体(SantaCruz公司)、EnVision试收稿

5、日期：2010—03—31；接受日期：2010—04—27作者简介：曹艳杰(1970一)，女，浙江宁波人，副主任医师，硕士Tel：0574-88126078；E—mail：eaoy觚jie2001@163．tom剂盒(DaKo公司)和DAB显色剂(Sigma公司)、PBS缓冲液(自制)、100mI／L中性甲醛溶液(自制)等。丹参涂膜剂、空白涂膜剂、肾上腺素涂膜剂均由上海中医药大学科技实验中心制备。1．2方法1．2．I模型制作将肥厚性瘢痕皮肤切成10mill×10nnn×2nlnl左右移植到裸鼠背部。每天给移植皮肤处滴加一次生

6、理盐水以保持创面和移植物的湿润，10d后拆线，确认动物造模是否成功。1．2．2动物分组24只实验动物裸鼠随机分为丹参组8只、模型对照组8只、肾上腺素组8只，分别放入饲养笼内继续饲养。1．2．3用药及取标本瘢痕组织于瘢痕移植成功模型建立后10d，瘢痕生长稳定后(即拆线后)开始用药。用丹参涂膜剂、空白涂膜剂和肾上腺素涂膜剂分别涂在裸鼠模氆背部的瘢痕处，1次／d，持续8周。用药持续8周后处死裸鼠。剪取裸鼠背部标本瘢痕组织并做好标记，迅速置于100mL／L中性甲醛溶液中固定。1．2．4细胞因子TGF-Bl、bFGF含量检测(1)En

7、Vision法染色步骤：取置于100mL／L中性甲醛溶液中的瘢痕组织；将标本集中用石蜡包埋，并切成4斗m的切片；常规脱蜡至水，分别用500、700、900mL／L乙醇依次脱水各15rain后，再用1000mL／L乙醇脱水15min，0．01mol／L、pH7．4的PBS洗3min×3次；在3mL／LH：02中孵育20min，抑制内源性过氧化物酶，PBS洗3rain×3次；将切片置于0．01mol／L、pH6．O的CB中，微波Ⅲ档(98℃)孵育10min×2次，修复抗原；PBS洗3winx3次，以10mL／L正常血清事温封闭2

8、0rain；分别加入抗TGF-B。、bFGF的一抗，4。C静置18h，PBS冲洗3min×3次；EnVision试剂37℃孵育30min，PBS冲洗3min×3次；应用DAB显色剂进行显色8—12rain；水洗，苏木精衬染30s，水洗，盐酸乙醇蓝化2s，水洗，微波蓝化，常规树脂封片。(2)