NF-κB通过抑制Cbl-b介导EGFR突变非小细胞肺癌对埃克替尼的耐药

《NF-κB通过抑制Cbl-b介导EGFR突变非小细胞肺癌对埃克替尼的耐药》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R592单位代码：10159密级：公开学号：201520213硕士学位论文中文题目：NF-κB通过抑制Cbl-b介导EGFR突变非小细胞肺癌对埃克替尼的耐药英文题目：SuppressedExpressionofCbl-bbyNF-κBMediatesIcotinibResistanceinEGFR-mutantNon-Small-CellLungCancer论文作者：张铁琼指导教师：胡雪君教授学科专业：老年医学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文NF-κB通过抑制Cbl-b介导EGFR突变非小细胞肺癌对埃克替尼的耐药SuppressedExpressionofCbl

2、-bbyNF-κBMediatesIcotinibResistanceinEGFR-mutantNon-Small-CellLungCancer论文作者张铁琼指导教师胡雪君教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科老年医学研究方向肺癌EGFR-TKI耐药论文起止时间2018年1月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学硕士学位论文中国医科大学硕士学位论文摘要目的：非小细胞肺癌(Non-small-celllungcancer,NSCLC)是肺癌中较为常见的类型，其中带有表皮生长因子受体突变的NSCLC在临床上则被认为

3、是有分子特异性的一个亚群。这一类突变也使表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitor,EGFR-TKI)发挥了很好的疗效。尽管EGFR-TKI可以极大的改善携带有EGFR激活性突变的病人的预后，但耐药仍然是治疗过程中的主要障碍。要想克服对EGFR-TKI的耐药，就必须阐明和耐药相关的具体机制。近年来研究者们虽然在这一方面取得了一些进展，但还有很大一部分耐药机制仍模糊不清。泛素连接酶Cbl-b(Casitas-B-lineagelymphomaprotein-B,Cbl-b)属于Cbl家族，它可

4、以负调控T细胞的激活，因此对淋巴系统的活化起着重要作用。生物化学和细胞生物学研究也证实Cbl蛋白可以通过溶酶体途径或蛋白酶体途径来泛素化降解蛋白酪氨酸激酶。近年来越来越多的研究也显示它是一个可以在许多恶性肿瘤中发挥抗癌作用泛素连接酶。由于我们之前的研究已经证实EGFR-TKI埃克替尼可以在非小细胞肺癌细胞系中上调Cbl-b的表达。因此，在本研究主要通过使用EGFR野生型和突变型的NSCLC细胞系来探讨Cbl-b在埃克替尼耐药中发挥的作用及其可能的机制。围绕这些问题，希望可以为克服EGFR-TKI耐药提供一些其他的策略。研究方法：1.人肺腺癌细胞系PC9，HCC827和A549培养在含1

5、0%胎牛血清、青霉素(100U/mL)和链霉素(100mg/mL)的RPMI-1640中，并置于37℃的恒温孵育箱。2.MTT检测不同浓度的埃克替尼对细胞的药物毒性。3.RT-qPCR检测细胞内Cbl-b的mRNA水平。4.向PC9和HCC827细胞中转染Cbl-b的小干扰RNA,从而沉默Cbl-b的表达。5.蛋白免疫印迹来检测细胞内蛋白的表达情况。6.通过Oncomine数据分析来比较Cbl-b在EGFR-TKI敏感和耐药细胞系中的表达差异。结果：1.埃克替尼可以抑制EGFR突变的NSCLC细胞系的增殖。将不同的NSCLC细胞系，包括EGFR突变的PC9和HCC827以及EGFR野生

6、型的A549细胞给予不同浓度的埃克替尼，处理24和48小时后用MTT法检测，结果为突变型细胞比野生型细胞对埃克替尼更敏感。2.埃克替尼在蛋白水平和mRNA水平上调Cbl-b的表达。作为一种有效的EGFR-TKI，埃克替尼以时间依赖的方式降低细胞内磷酸化IV中国医科大学硕士学位论文EGFR、AKT和ERK水平，同时还使Cbl-b的蛋白水平和mRNA水平上调。3.敲除Cbl-b后肺癌细胞对埃克替尼的敏感性下降。为了探究Cbl-b是如何影响NSCLC细胞对埃克替尼的敏感性，接下来通过小RNA干扰的方式在PC9和HCC827细胞中敲除了Cbl-b。细胞活力结果表明和对照组相比，敲除了Cbl-b

7、的细胞对埃克替尼敏感性下降。另外免疫印迹显示在PC9细胞中，敲除Cbl-b后可部分恢复由埃克替尼所引起的磷酸化AKT的抑制。4.Cbl-b高表达与EGFR-TKI敏感相关。首先建立对埃克替尼耐药的PC9细胞，MTT法证实耐药细胞确实对埃克替尼产生抵抗。免疫印迹和PCR结果表明和敏感细胞相比，耐药细胞Cbl-b的蛋白和mRNA水平均更低。另外从Oncomine的数据分析中也可以得到同样的结论。5.埃克替尼通过抑制NF-κB来上调Cbl-b的表达。