γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响

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1、学校代码10459学号或申请号201512524293密级公开硕士学位论文γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响作者姓名：赵静静导师姓名：韩双印学科门类：医学专业名称：内科学培养院系：郑州大学人民医院完成时间：2018年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterInfluenceofγ-chain(γc)familycytokineonphenotypeofTcellsculturedinvitroByJingjingZhaoSupervisor:Prof.Shuangyi

2、nHanInteralMedicinePeople'sHospitalofZhengzhouUniversityMay2018学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同

3、意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响研究生：赵静静导师：韩双印郑州大学人民医院消化科郑州450003摘要目的过继免疫治疗是近年来越来越令人瞩目和鼓舞人心的癌症治疗方法，其中嵌合抗原受体T细胞

4、（chimericantigenreceptorengineeredTcells,CAR-T）已成为治疗血液肿瘤的利剑，理想的效应细胞杀伤性强、持久性高、抗肿瘤效果佳，可作为稳定的记忆细胞存在于患者体内以预防癌症复发。因此制备高效能的T细胞是以嵌合抗原受体为基础的肿瘤过继免疫治疗成功的关键。研究表明，CAR-T的治疗效果与T细胞的分离、激活与扩增及T细胞表型密切相关。本研究通过探讨从外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMC）分选T细胞的最佳方法及γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响，为肿瘤的过继免

5、疫治疗提供实验依据。方法1.抽取5名体健志愿者外周血40ml于肝素抗凝管中，Ficoll密度梯度法提取外周血单个核细胞，计数。2.采用尼龙毛柱法、CD3磁珠阳性分选法、CD3磁珠阴性分选法和自然沉降法从PBMC中分选T细胞，流式细胞术比较四种方法的纯度和细胞活性、细胞计数计算回收率。3.CD3/CD28磁珠激活细胞，将γc家族细胞因子分为IL-2组和混合组（IL-7、IL-15、IL-21），在含有IL-2和混合细胞因子的AIMV培养基中分别培养CD3+T，定期计数比较扩增倍数差异，流式细胞术检测细胞表型差异。4.收集培养所得T细胞，CFDASE染色，

6、流式细胞仪检测IL-2与IL-7、IL-15、IL-21对细胞增殖的影响。I结果1.尼龙毛柱法、CD3磁珠阳性分选法、CD3磁珠阴性分选法和自然沉降法四种方法分选所得T细胞纯度依次为：（86.74±1.06）%、（89.61±1.40）%、（94.06±1.07）%、（88.48±1.86）%。细胞活性依次为：（97.21±0.82）%、（97.99±1.11）%、（97.25±1.07）%、（98.61±1.10）%。回收率依次为：（45.03±2.79）%、（20.15±3.41）%、（42.98±2.82）%、（60.29±1.53）%。2.IL

7、-2组与混合组T细胞扩增倍数为（262.6±143.2）vs（73.0±25.8）。IL-2组与混合组的早期记忆T细胞、Tscm+Tscm-like、Tcm占总T细胞的比例为（39.6±1.52）%vs（55.6±1.82）%，（9.8±1.30）%vs（16.6±1.82）%，（29.8±1.79）%vs（39.0±1.58）%。3.IL-2组与混合组对T细胞增殖的影响：培养至第10天，在IL-2作用下，T细胞增殖大多增殖到8、9代，而在混合细胞因子作用下T细胞多增殖至第6、7代，IL-2组与混合组的增殖指数（theProliferationinde

8、xofTcells，PI）为48.2和22.54.结论1.综合比较四种方法的成本、耗时、T细胞