食管鳞癌中Rictor表达水平与细胞对mTOR抑制剂敏感性的关系及分子机制

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1、学校代码10459学号或申请号201512283249密级公开硕士学位论文食管鳞癌中Rictor表达水平与细胞对mTOR抑制剂敏感性的关系及分子机制作者姓名：田菲导师姓名：鲁照明学科门类：医学专业名称：药理学培养院系：药学院完成时间：2018年4月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTherelationshipbetweentheexpressionlevelofRictorandcellsensitivitytomTORinhibitorsanditsmolecul

2、armechanismBy:FeiTianSupervisor:AssociateProf.ZhaomingLuDepartmentofPharmacologySchoolofPharmaceuticalSciencesApril,2018原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文

3、及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日本课题由下列基金资助河南省基础与前沿技术研究计划项目---批准号：162300410122在此深表感谢！摘要目的探讨人食管鳞癌组织中R

4、ictor、p-Akt表达及临床意义，并探讨食管鳞癌细胞中Rictor表达水平与细胞对mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）敏感性的关系及分子机制。方法一、人食管鳞癌组织中Rictor、p-Akt表达及临床意义分析通过免疫组化法检测150例食管鳞癌组织和正常食管组织中Rictor和p-Akt的表达情况，并使用卡方检验、Spearman秩相关分析探讨二者在食管鳞癌中的临床意义。二、下调Rictor表达后细胞对mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）敏感性的变化1.用Lipo3000TM将Rictor-shRNA和Control-shRNA转染ECa109细胞，并用嘌呤霉素筛选稳

5、定表达Rictor-shRNA和Control-shRNA的ECa109细胞株（ECa109-Rictor-shRNA和ECa109-Control-shRNA），免疫印迹法检测两株细胞中Rictor的表达情况。2.采用CCK-8法检测mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）对ECa109和EC9706细胞增殖的影响，并计算mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）作用食管鳞癌ECa109、EC9706细胞24h和48h的IC50。3.分别用ECa109-Rictor-shRNA和ECa109-Control-shRNA细胞建立裸鼠移植瘤模型，检测mTOR抑制剂（依维莫司和PP2

6、42）对不同Rictor水平肿瘤生长的影响。4.采用H&E染色法和TUNEL法检测裸鼠移植瘤组织中细胞形态和细胞凋亡情况。三、下调Rictor表达后细胞对mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）敏感性变化的分子机制采用免疫印迹法体内外检测下调Rictor后mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）对PI3K/Akt/mTOR通路中相关因子表达的影响。结果一、人食管鳞癌组织中Rictor、p-Akt呈阳性表达并具有显著的临床意义食管鳞癌组织中Rictor及p-Akt的阳性表达率显著高于正常食管组织中的阳I性表达率，且二者与患者的TNM分期具有显著相关性；食管鳞癌组织中Rictor表

7、达水平与p-Akt表达水平呈正相关。二、下调Rictor表达后细胞对mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）敏感性增强1.成功筛选出稳定表达株ECa109-Rictor-shRNA和ECa109-Control-shRNA。免疫印迹法结果显示与后者相比，前者细胞中Rictor表达明显降低。2.CCK-8结果显示随着mTOR抑制剂（依维莫司和PP242）浓度的增加及作用时间的延长，ECa109和EC9706细胞的存活率明显下降。依维莫司作用ECa109细胞24h和48h的IC50分别为52.18±1.72µM和19.0