乙型肝炎病毒对肾小管上皮细胞直接作用的实验研究.doc

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1、乙型肝炎病毒对肾小管上皮细胞直接作用的实验研究【摘要】目的:探讨乙型肝炎病毒（HBV）在体外对人肾小管上皮细胞（HKC）的直接致病作用。方法:①HBV体外感染HKC：培养的HKC传至6孔板中，接种密度为1×106个/ml，孵育24h后分受感染和阴性对照两组。受感染组加入0.5mlHepG2.2.15细胞上清液（含有HBV）；阴性对照组加入0.5ml10%FCS-DMEM/F-12培养液。两组HKC继续孵育72h，消化，离心沉淀，PBS清洗，实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组HKC中的HBVDNA含量。②HBV对体外培养的H

2、KC细胞直接作用：HKC细胞传至24孔板中，接种密度为1×105个/ml，受感染组分三个亚组，分别加入100μl、200μl和300μl的感染用HepG2.2.15细胞上清液；阴性对照组为接种HKC后加入培养液常规培养；阳性对照组为HepG2.2.15细胞上清液。各组的每孔终体积均为2ml，每组设3复孔。孵育72h后收集各孔上清液，ELISA法检测转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果:①受感染组HKC的基因组中检测到HBVDNA。②受感染组的三个亚组细胞培养上清的TGF-β1与阴性对照组比较差异均有显著性。结论:HBV可感染HK

3、C并促进其分泌TGF-β1。【关键词】细胞培养技术；肝炎病毒，乙型；感染；HepG2.2.15细胞Abstract:Objective:ToinvestigatethedirectpathogeniceffectsofHepatitisBvirus（HBV）onhumantubularkidneycells(HKCs)invitro.Methods:HKCswereinfectedbyHBV:HKCswereseededintosixwellclusterdishes,at1×106cellsperml.24hourslater，HKC

4、sweredividedintocontrolgroupandinfectedgroup.Cellsofinfectedgroupwereculturedwith0.5mlsupernatantofHepG2.2.15cells,while0.5ml10%FCS-DMEM/F-12wasusedincontrolgroup.72hlater,alloftheHKCswereremovedandthenwashedwithPBS.HBVDNAwasdetectedbyfluorescentquantitationpolymerasecha

5、inreaction(FQ-PCR).DirectpathogeniceffectsofHBVonHKCs:HKCswereseededintotwentyfourwellclusterdishes,at1×105cellsperml.Negativecontrolgroup,positivecontrolgroupandinfectedgroupwereestablished.HKCsofinfectedsubgroupswereculturedwith100μl,200μland300μlsupernatantofHepG2.2.1

6、5cells,respectively.CellsofnegativecontrolgroupwereculturedwithFCS-DMEM/F-12.CellsofpositivecontrolgroupwereculturedwithsupernatantofHepG2.2.15.Supernatantfromeachwellwascollectedafter72hours.TheexpressionofTGF-β1wasdetectedwithELISA.Results:HBVDNAwasobservedinthegenomeo

7、fHKC.IntheHKC,persistentinfectionofHBVenhancedtheexpressionoftransforminggrowthfactorβ1（TGF-β1）.Conclusion:HumantubularepithelialcellissusceptibletoHBVandHBVinfectioncanenhancetheexpressionofTGF-β1.6Keywords:cellculturetechniques;HepatitisBvirus;infection;HepG2.2.15cell乙

8、型肝炎病毒（HBV）相关性肾炎的发病机制尚不清楚。虽然免疫复合物介导机制已被多数学者接受，但对于患者肾组织存在的HBVDNA和病毒抗原与肾炎发生的关系仍有争论，至今并不明确肾脏固有细胞对HBV的易感性。已知