葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶表达的调控作用.doc

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1、葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶表达的调控作用【摘要】探讨葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶（aromataseP450,P450arom）表达的影响及其对RL952细胞P450arom基因表达的调控作用。方法：将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL952细胞中，分别采用实时聚合酶链反应（realtimepolymerasechainreaction,RTPCR）检测药物对RL952细胞P450arommRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2（PⅡ）转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载

2、体pGL3Basic中，构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒，并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL952细胞，加入葛根素刺激，分析相关转录因子，利用RTPCR及Westernblotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果：与溶剂对照组比较，低浓度葛根素会抑制P450arommRNA表达（P<0.01），抑制作用在6、12h较显著（P<0.01）。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定，成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒（－1017，－763，－543，－234～+8bp）。瞬时转

3、染系列质粒至细胞中，于12h后加入葛根素（10－7mol/L）刺激，又12h后检测荧光蛋白水平。结果表明，－763～－543bp间的活性被抑制（P<0.05），通过转录因子分析找到了－410/－401bp的AP1（cjun/cfos）。利用RTPCR、Westernblotting及荧光素酶活性检测发现葛根素（107mol/L）对AP1（cjun/cfos）的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论：低浓度葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP1（cjun/cfos）的影响。【关键词】葛根素芳香化酶

4、P450子宫内膜异位症1IntroductionAromataseP450(P450arom)isakeyenzymeforbiosynthesisofestrogenwhichisanessentialhormonefortheestablishmentandgrowthofendometriosis.Endometriosistissuecontainsveryhighlevelsofaromatase,whichleadstoproducesignificantquantitiesofestrogen［1］.Apartfromendometriosis,endometrialcan

5、cersanduterinefibroidsalsooverexpressaromataseandproducelocalestrogenthatexertsparacrineandintracrineeffects.Thismaypartiallyresultfromthemolecularalterationsinstromalcells,whichisaromatasepromoter'sfavorofbindingtranscriptionalenhancersversusinhibitorstoinitiatetranscription［2,3］.Sothearomatase

6、inhibitors(AI)havesuccessfullybeenusedtotreatendometriosisanduterineleiomyomataandunderlinedtheclinicalsignificanceofthesemolecularstudiesofAI［24］.11Flavonoidsandisoflavones,asphytoestrogens,exertvariousbiologicaleffects,includingantiestrogeniceffects,modulationofsexhormonehomeostasis,anticarci

7、nogenicandantioxidanteffects［5］.Theymodulateenzymeactivitiesaswellassignaltransduction,sotheireffectsonP450aromandinteractionwithestrogenreceptorareofinteresttoinvestigate.Arecentstudyshowedthathigherlevelsofurinarygen