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时间:2018-09-01
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1、葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶表达的调控作用【摘要】探讨葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶(aromataseP450,P450arom)表达的影响及其对RL952细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL952细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(realtimepolymerasechainreaction,RTPCR)检测药物对RL952细胞P450arommRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2(PⅡ)转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载
2、体pGL3Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL952细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RTPCR及Westernblotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果:与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450arommRNA表达(P<0.01),抑制作用在6、12h较显著(P<0.01)。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒(-1017,-763,-543,-234~+8bp)。瞬时转
3、染系列质粒至细胞中,于12h后加入葛根素(10-7mol/L)刺激,又12h后检测荧光蛋白水平。结果表明,-763~-543bp间的活性被抑制(P<0.05),通过转录因子分析找到了-410/-401bp的AP1(cjun/cfos)。利用RTPCR、Westernblotting及荧光素酶活性检测发现葛根素(107mol/L)对AP1(cjun/cfos)的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论:低浓度葛根素对子宫内膜RL952细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP1(cjun/cfos)的影响。【关键词】葛根素芳香化酶
4、P450子宫内膜异位症1IntroductionAromataseP450(P450arom)isakeyenzymeforbiosynthesisofestrogenwhichisanessentialhormonefortheestablishmentandgrowthofendometriosis.Endometriosistissuecontainsveryhighlevelsofaromatase,whichleadstoproducesignificantquantitiesofestrogen[1].Apartfromendometriosis,endometrialcan
5、cersanduterinefibroidsalsooverexpressaromataseandproducelocalestrogenthatexertsparacrineandintracrineeffects.Thismaypartiallyresultfromthemolecularalterationsinstromalcells,whichisaromatasepromoter'sfavorofbindingtranscriptionalenhancersversusinhibitorstoinitiatetranscription[2,3].Sothearomatase
6、inhibitors(AI)havesuccessfullybeenusedtotreatendometriosisanduterineleiomyomataandunderlinedtheclinicalsignificanceofthesemolecularstudiesofAI[24].11Flavonoidsandisoflavones,asphytoestrogens,exertvariousbiologicaleffects,includingantiestrogeniceffects,modulationofsexhormonehomeostasis,anticarci
7、nogenicandantioxidanteffects[5].Theymodulateenzymeactivitiesaswellassignaltransduction,sotheireffectsonP450aromandinteractionwithestrogenreceptorareofinteresttoinvestigate.Arecentstudyshowedthathigherlevelsofurinarygen
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