反义X区RNA和反义P区RNA小鼠体内抗HBV的比较.doc

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1、反义X区RNA和反义P区RNA小鼠体内抗HBV的比较【关键词】基因疗法；肝炎病毒,乙型；RNA,反义；小鼠,转基因　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofantisenseRNAofhepatitisBvirus(HBV)inXregionandPregiononreplicationandexpressionofHBVgeneinHBVtransgenicmice.METHODS:Recombinantvectorplasmidsexpressingantis

2、enseRNAcomplementarytoHBVXregionandantisenseRNAcomplementarytoHBVPregionwereconstructedandinjectedintotransgenicmicethroughtailvein.Theexperimentalmiceweredividedintoblank,PLXSN,PLXSNasXandPLXSNasPgroups.HBVDNAinserumwastestedbyfluorescentquantitativePC

3、RandNestedPCR.RESULTS:TheexpressionofHBVDNAinserumwasinhibitedinPLXSNasXgroupatday2afterinjectionandstillinhibitedatweek8,whileitwasinhibitedinPLXSNasPgroupatweek4andreachedthelowestatweek8.InPLXSNasXgroupandPLXSNasPgroup,thestrongestinhibitoryeffectont

4、heexpressionofHBVDNAreached58%atthe2ndweekand8thweekaftertreatmentrespectively.TheserumHBVDNAof2/8miceinthePLXSNasXgroupand1/8miceinthePLXSNasPgroupbecamenegative.CONCLUSION:TheantiviraleffectofantisenseRNAinXregionofHBVwasearlierthanthatofantisenseRNAi

5、nPregionofHBV.Butthedifferenceofantiviraleffectbetweenthe2regionswasnotsignificant.　　【Keywords】genetherapy;hepatitisBvirus;RNA,antisense;mice,transgenic　　【摘要】　目的：探讨针对乙型肝炎病毒(HBV)X区反义ＲＮＡ和P区反义ＲＮＡ对乙型肝炎转基因小鼠HBV复制和表达的影响.方法：构建表达HBVX区反义RNA和P区反义RNA的重组载体质粒,与脂质体混合

6、，经尾静脉注入小鼠体内，用荧光聚合酶链反应定量法检测血清HBVDNA含量，用NestedPCR法检测血清HBVDNA转阴率.结果：PLXSNasX小鼠血清HBVDNA的复制于给药后2d被抑制，至给药后8周抑制依然存在；PLXSNasP小鼠血清HBVDNA的复制于给药后4wk被抑制，至给药后8周抑制处于上升趋势.与给药前相比，小鼠血清HBVDNA的复制，在PLXSNasX组和PLXSNasP组分别于2和8wk达到抑制高峰，抑制率均为58%；8周后小鼠血清HBVDNA转阴率PLXSNasX组和PLXSNa

7、sP组分别为25.0%(2/8),12.5%(1/8).结论：HBVＸ区反义RNA与HBVP区反义RNA对乙型肝炎病毒转基因鼠抗HBV作用效率无显著差异，但Ｘ区反义RNA的起效时间明显早于P区反义RNA.　　【关键词】基因疗法；肝炎病毒，乙型；RNA，反义；小鼠，转基因4　　0引言　　近年来基因治疗是治疗乙型肝炎的研究热点之一.而对于反义基因的体外研究已相对成熟［12］，马春红等［3］将抗HBV的反义寡核苷酸片段进行体外比较、筛选.在此基础上，随着乙型肝炎病毒全基因模型的建立［4］对反义基因的研究逐渐

8、转入体内.我们在体外实验的基础上［5］将反义X区RNA和反义P区RNA转染乙型肝炎病毒转基因小鼠，研究其对HBV抑制作用.　　1材料和方法　　1.1材料①逆转录病毒载体(pLXSN)由鼠肉瘤病毒改建，由北京大学第一医院提供.分子克隆所用的各种工具酶均购自美国Biolab公司.质粒提取试剂盒，胶回收纯化试剂盒等购自洛阳华美公司.引物序列由北京赛百胜公司合成.脂质体购自美国Q.BIOgene公司.②转基因鼠购自广州空军医院［4］，血清HBsAg(+)，HBV