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时间:2018-08-31
《反义X区RNA和反义P区RNA小鼠体内抗HBV的比较.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、反义X区RNA和反义P区RNA小鼠体内抗HBV的比较【关键词】基因疗法;肝炎病毒,乙型;RNA,反义;小鼠,转基因 【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofantisenseRNAofhepatitisBvirus(HBV)inXregionandPregiononreplicationandexpressionofHBVgeneinHBVtransgenicmice.METHODS:Recombinantvectorplasmidsexpressingantis
2、enseRNAcomplementarytoHBVXregionandantisenseRNAcomplementarytoHBVPregionwereconstructedandinjectedintotransgenicmicethroughtailvein.Theexperimentalmiceweredividedintoblank,PLXSN,PLXSNasXandPLXSNasPgroups.HBVDNAinserumwastestedbyfluorescentquantitativePC
3、RandNestedPCR.RESULTS:TheexpressionofHBVDNAinserumwasinhibitedinPLXSNasXgroupatday2afterinjectionandstillinhibitedatweek8,whileitwasinhibitedinPLXSNasPgroupatweek4andreachedthelowestatweek8.InPLXSNasXgroupandPLXSNasPgroup,thestrongestinhibitoryeffectont
4、heexpressionofHBVDNAreached58%atthe2ndweekand8thweekaftertreatmentrespectively.TheserumHBVDNAof2/8miceinthePLXSNasXgroupand1/8miceinthePLXSNasPgroupbecamenegative.CONCLUSION:TheantiviraleffectofantisenseRNAinXregionofHBVwasearlierthanthatofantisenseRNAi
5、nPregionofHBV.Butthedifferenceofantiviraleffectbetweenthe2regionswasnotsignificant. 【Keywords】genetherapy;hepatitisBvirus;RNA,antisense;mice,transgenic 【摘要】 目的:探讨针对乙型肝炎病毒(HBV)X区反义RNA和P区反义RNA对乙型肝炎转基因小鼠HBV复制和表达的影响.方法:构建表达HBVX区反义RNA和P区反义RNA的重组载体质粒,与脂质体混合
6、,经尾静脉注入小鼠体内,用荧光聚合酶链反应定量法检测血清HBVDNA含量,用NestedPCR法检测血清HBVDNA转阴率.结果:PLXSNasX小鼠血清HBVDNA的复制于给药后2d被抑制,至给药后8周抑制依然存在;PLXSNasP小鼠血清HBVDNA的复制于给药后4wk被抑制,至给药后8周抑制处于上升趋势.与给药前相比,小鼠血清HBVDNA的复制,在PLXSNasX组和PLXSNasP组分别于2和8wk达到抑制高峰,抑制率均为58%;8周后小鼠血清HBVDNA转阴率PLXSNasX组和PLXSNa
7、sP组分别为25.0%(2/8),12.5%(1/8).结论:HBVX区反义RNA与HBVP区反义RNA对乙型肝炎病毒转基因鼠抗HBV作用效率无显著差异,但X区反义RNA的起效时间明显早于P区反义RNA. 【关键词】基因疗法;肝炎病毒,乙型;RNA,反义;小鼠,转基因4 0引言 近年来基因治疗是治疗乙型肝炎的研究热点之一.而对于反义基因的体外研究已相对成熟[12],马春红等[3]将抗HBV的反义寡核苷酸片段进行体外比较、筛选.在此基础上,随着乙型肝炎病毒全基因模型的建立[4]对反义基因的研究逐渐
8、转入体内.我们在体外实验的基础上[5]将反义X区RNA和反义P区RNA转染乙型肝炎病毒转基因小鼠,研究其对HBV抑制作用. 1材料和方法 1.1材料①逆转录病毒载体(pLXSN)由鼠肉瘤病毒改建,由北京大学第一医院提供.分子克隆所用的各种工具酶均购自美国Biolab公司.质粒提取试剂盒,胶回收纯化试剂盒等购自洛阳华美公司.引物序列由北京赛百胜公司合成.脂质体购自美国Q.BIOgene公司.②转基因鼠购自广州空军医院[4],血清HBsAg(+),HBV
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