桂枝、柴胡与白芍分别配伍的相关药效学研究.doc

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1、桂枝、柴胡与白芍分别配伍的相关药效学研究【摘要】目的研究桂枝、柴胡与白芍分别配伍后的相关药效学作用。方法以酚红比色法观察生理状态下小鼠胃排空、小肠推进功能；放免法测生理状态下小鼠血清内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）；给予小鼠以1.1%冰醋酸腹腔注射致痛、致炎法观察药物的抗炎、镇痛作用。结果与正常组比较，柴芍低剂量组抑制小鼠胃排空、小肠推进功能，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；柴芍高剂量组抑制小鼠胃排空、小肠推进功能（Ｐ＜０．００１）；各药对组对正常小鼠血清ＥＴ含量无明显影响（Ｐ＞０．０５）。与模型对照组比较，桂芍低和高剂量组、柴芍低剂量组均能减少小鼠扭体次数，差异有统计学

2、意义（Ｐ＜０．０１）；柴芍高剂量组减少小鼠扭体次数，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；桂芍高剂量组降低小鼠腹腔毛细血管通透性，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论柴芍配伍后具有解痉作用与镇痛作用；桂芍配伍后具有镇痛、抗炎作用，且桂芍配伍后在镇痛作用方面具有协同作用。【关键词】桂枝；柴胡；白芍；配伍；药效学；小鼠１材料与方法１．１材料１．１．１动物昆明种小鼠２５０只，普通级，体质量（２０±２）ｇ，雌雄各半，由湖南中医学院动物实验中心提供实验动物。１．１．２药物桂枝、柴胡、白芍。全部药材购自湖南中医药大学第一附属医院药房，经湖南中医药大学药植教研室鉴定为正品。硫酸阿托品注射液（无

3、锡市第四制药厂，批号：９９０１０２）；阿司匹林片（中国上海信谊药厂，批号：９９０２０１－１９３号）。１．１．３仪器ＦＡ１００４电子分析天平（上海精科天平厂）；ＤＤ－Ｓ型低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；半自动生化光谱分析仪（法国西克曼公司）。１．１．４试剂ＥＴ试剂盒（北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号２００６０６２５）；苯酚红，分析纯（广州化学试剂厂，批号：９８０９１０）；伊文思蓝（上海化学试剂采购供应站分装厂，批号：９９０８０７）。１．２方法１．２．１动物分组4先按性别和体质量分层，用随机数字表法随机分为２５组。每组为１０只，各组均为雌雄各半。小鼠胃排空、小肠推进

4、功能实验及小鼠血清ＥＴ含量测定共分１３组，正常组，桂枝低、高剂量组，白芍低、高剂量组，柴胡低、高剂量组，桂芍低、高剂量组，柴芍低、高剂量组，阿托品组，阿司匹林组，其中阿托品组为胃排空、小肠推进功能的阳性药物对照组，阿司匹林组为血清ＥＴ的阳性药物对照组；冰醋酸致炎、致痛小鼠扭体次数、腹腔血管通透性实验共分１２组，测生理状态小鼠胃排空、小肠推进功能分组中正常组换为模型对照组，去阿托品组，余组同上。１．２．２药物剂量按体表面积换算，相当于成人（７０ｋｇ）剂量的５倍为小鼠的低剂量，１０倍为高剂量。测生理状态小鼠胃排空、小肠推进功能；生理状态小鼠血清ＥＴ；冰醋酸致炎、致痛小鼠扭体次数、腹

5、腔血管通透性的各组小鼠用药量（生药量）均为：桂枝低剂量６．５ｇ／ｋｇ、高剂量１３ｇ／ｋｇ；白芍低剂量６．５ｇ／ｋｇ、高剂量１３ｇ／ｋｇ；柴胡低剂量６．５ｇ／ｋｇ、高剂量１３ｇ／ｋｇ；桂芍低剂量１３ｇ／ｋｇ、高剂量２６ｇ／ｋｇ；柴芍低剂量１３ｇ／ｋｇ、高剂量２６ｇ／ｋｇ。乙酰水杨酸８０mｇ／１００ｇ；阿托品１ｍｇ／１００ｇ。１．２．３小鼠胃排空、小肠推进功能测定采用酚红定量测定法［２］。各组给药灌胃体积为０．２ｍＬ／１０ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ｄ，末次给药１ｈ后灌胃０．１％酚红０．８ｍＬ／只，给酚红３０ｍｉｎ后处死动物，取胃及小肠全段，并将小肠全长均分为５段．将胃肠各段放入３ｍＬ

6、０．１ＭＮａＯＨ液中消化提取。经２４ｈ消化后以１ｍＬ２０％三氯乙酸沉淀蛋白，经３０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上清液１ｍＬ，加入３ｍＬ０．５ＭＮａＯＨ．混匀后于５６０ｎｍ波长比色，记录ＯＤ值。１．２．４ＥＴ采用放射免疫法测定各组给药灌胃体积为０．２ｍＬ／１０ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ｄ后取血，按照试剂盒说明采用放射免疫法测定。１．２．５小鼠扭体次数的观察［３］３０６各组给药灌胃体积为０．２ｍＬ／１０ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ｄ，末次给药１ｈ后，腹腔注射１．１％冰醋酸，注射后５～２０ｍｉｎ内直接观察动物的扭体次数。１．２．６小鼠腹腔血管通透性的测定［３］３０６各组给药灌胃体积为０

7、．２ｍＬ／１０ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ｄ，末次给药１ｈ后，腹腔注射１．１％冰醋酸，于注射后３０ｍｉｎ，每鼠尾静脉注射０．５％伊文思蓝生理盐水溶液０．１ｍＬ／１０ｇ体质量。２０ｍｉｎ后脱颈椎处死，轻揉腹部５０次后，剪开腹部皮肤肌肉，用５ｍＬ生理盐水冲洗腹腔．并收集腹腔液，经３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ取上清液于５９０ｎｍ比色，记录ＯＤ值。１．３统计学分析计量资料结果用ｘ±ｓ表示，各组间比较，先进行方差齐性检验，如方差齐用两两比较用ＬＳＤ检验；如方差不齐，则按秩和Ｈ检验。全部数据用ＳＰＳＳ１２