结膜印迹细胞学课件

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1、结膜印迹细胞学陈辉美国DEANAMCGEE眼科研究所博士后四川省人民医院眼科副主任医师原理方法CIC的结果判定标准CIC的临床意义原理由于在各种致病因素(如:vita缺乏,感染,过敏损伤等)的影响下,眼表细胞(结膜、角膜上皮、杯状细胞)在细胞间连接和细胞的形态、细胞的炎性标志的表达等方面将发生相应改变,这就为对眼表疾病的检测提供了病理学基础,传统的思维是对眼表进行刮片等侵入性方式作病理检查,但其敏感性、特异性均不令人狻W1977年,Egbert在眼科使用醋酸纤维膜(AcetateCellulo

2、se)以来,结膜印迹细胞学(ConjunctibaiImpressionCytology)得以迅速发展。①原理由于醋酸纤维膜为惰性物质,不与组织反应,无毒性,但具有粘附性,使其成为一种对眼表疾病进行非侵入性病检的理想工具,然后将所有取下的标本与传统的染色、免疫荧光、过氧化物酶染色、电泳等技术相结合,使眼科工作者能够对相关疾病作出早期诊断、治疗、预防。②方法(一)传统细胞学检查:(二)免疫过氧化物酶染色:(三)免疫荧光染色:目前,传统的细胞学染色方法甚多,染色原理基本相同,现仅简介其中的一种细胞学

3、染色方法:1,用醋酸纤维膜印取结膜、角膜细胞、分泌物并固定。2,按序使用过碘酸、Shiff’s试剂、Mayer’s苏木精、95%乙醇、100%乙醇进行细胞染色。(一)传统细胞学检查:①(一)传统细胞学检查:3,使用透明液(10%乙醇:冰醋酸=7:3体积比)对纤维膜进行透明。4,载片镜检。②(二)免疫过氧化物酶染色:1,用纤维膜印取标本并固定。2,以磷酸缓冲盐为浴液,将标本先后置于抗体浴液(免抗HSV-1抗体,鼠抗VZX抗体)和商业用过氧化物酶—抗过氧化物酶试剂盒中培育。3,镜检。(三)免疫荧光染

4、色:1,用纤维膜印取标本。2,将标本先后置于第一抗体(鼠抗-VZX抗体)和第二抗体(FITC标记的山羊抗鼠IgG抗体中。3,荧光显微镜下镜检。4,相对应,以HLADR的单克隆抗体,IgE受体的单克隆抗体为第一抗体,以fluroresccinisothlecyanate标记的抗鼠免疫球蛋白抗血清为第二抗体,可检测细胞炎性表达物。CIC的结果判定标准一、细胞学评价:二、免疫过氧化物酶染色(+):三、免疫荧光学评价:一、细胞学评价1、评价内容:2、Tseng的六级分类标准:1、评价内容(1)视野(1-

5、3个)中杯状细胞存在与否及密度。(2)上皮细胞核形态改变情况。(3)上皮细胞核浆(N/C)比值。(4)胞浆染色后颜色变化情况。2、Tseng的六级分类标准:0级:为正常细胞,上皮大小基本一致,胞浆呈蓝绿色,上皮细胞散在中等量杯状细胞,N/C=1:1但需注意杯状细胞密度随取材部位不同而存在生理分布差异。(高-)低:鼻侧睑结膜>颞侧>穹隆>角巩膜缘)Ⅰ级:杯状细胞开始减小,但无角化,杯状细胞密度下降,结膜上皮细胞轻度扩大,胞浆仍呈蓝绿色,N/C=1/2~1/3.Ⅱ级:杯状细胞全部丧失,但无角化,所有

6、结膜上皮细胞均扩大变扁,胞浆蓝绿色或粉红色,N/C=1/4.①2、Tseng的六级分类标准:Ⅲ级:早期轻度角化。所有上皮细胞胞浆均呈粉红色,上皮明显角化,部分胞浆内可见角蛋白,N/C=1/6.Ⅳ级:中度角化,除上述Ⅲ级改变外,许多细胞内见大量堆积的角蛋白及角质透明蛋白颗粒,胞核固缩或崩解成碎片。Ⅴ级:严重角化,上皮胞浆浓缩,可见大量角蛋白、胞核固缩或崩解成碎片。②三、免疫荧光学评价:1,正常人:针对Ⅱ类抗原HLADR和IgE受体CD23的免疫细胞学为阴性,但少数人孤立的树突细胞和抗-HLADR单

7、克隆抗体强反应,但不和抗CD23单克隆抗体反应,有<10%的人的标本对抗-HLADR抗体和/或抗CD23抗体产生小部分细胞弱反应。2,慢性结膜炎:在大部分结膜炎中都和单克隆抗体强烈反应。在大部分标本中,两种抗体皆反应,但HLADR阳性细胞反应更常见,在应用激素的患者因免疫抑制作用,标本可呈阴性。①三、免疫荧光学评价:3,泪液缺陷患者:24名临床干燥角化异物患者两种抗体(一).2名Sjogren’sSyndrome患者HLADR(+)(90-10%的结膜细胞):IgE受体(一),(<10%结膜细胞

8、阳性Stevens-JohnsenSyndrome患者HLADR(+),IgE受体(+)(95%的结膜细胞阳性)。8个标本泪液缺陷者对HLADR,IgE受体示若阳性。4,在HSV,VZV,腺病毒感染者,免疫荧光99.5~100%阳性,具有高度特异性、敏感性。②CIC的临床意义目前运用CIC对眼表各种疾病的检测结果显示其异常改变如下:1,VitA缺乏病:CIC分级多在3-4级,该法敏感特异,而传统的VitA缺乏主要依靠血清测定VitA含量,繁琐、昂贵,难以广泛开展,CIC的优势显而易见。2,Thi

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