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《gb 5009.206-2016 食品安全国家标准 水产品中河豚毒素的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB5009.206—2016食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB5009.206—2016前言本标准代替GB/T23217—2008《水产品中河豚毒素的测定液相色谱-荧光检测法》、GB/T5009.206—2007《鲜河豚鱼中河豚毒素的测定》和SN/T1569.2—2013《出口河豚鱼中河豚毒素检测方法第2部分:小鼠生物法》。本标准与GB/T5009.206—2007相比,主要变
2、化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定”;———增加了净化步骤;———修改了酶联免疫吸附法。ⅠGB5009.206—2016食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定1范围本标准规定了水产品中河豚毒素的测定方法。本标准第一法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第二法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第三法适用于河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤和鱿鱼中河豚毒素的测定。第四法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第一法小鼠生物法2原理根据河豚
3、毒素易溶于酸性溶液原理,试样制备后经两次乙酸溶液(0.5%)煮沸提取,20000g离心收集上清液,将两次上清液合并定容至25mL,用于小鼠生物试验。根据小鼠注射试样提取液后的死亡时间,查出鼠单位,并按小鼠体重校正鼠单位,计算确定河豚毒素含量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,实验用水为GB6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1冰乙酸(CH3COOH)。3.1.2氢氧化钠(NaOH)。3.2试剂配制3.2.1乙酸溶液(0.5%):将5mL冰乙酸用水稀释至1L。3.2.2氢氧化钠溶液(1mol/L):将
4、40g氢氧化钠用水溶解并定容至1000mL。3.3标准品河豚毒素(C11H17N3O8,CAS号:4368-28-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.4实验动物小白鼠:体重19.0g~21.0g,无特定病原体级(SPF)昆明系雄性健康小鼠。4仪器和设备4.1均质器:≥12000r/min。1GB5009.206—20164.2电子天平:感量0.1g。4.3离心机:离心力≥30000g。4.4秒表。5分析步骤注:为避免毒素的危害,应戴手套进行检验操作。移液器吸头等用过的器材、废弃的提取液等应在
5、氢氧化钠溶液(1mol/L)中浸泡1h以上,以使毒素分解。5.1试样制备5.1.1冷冻河豚鱼样品将样品装于密封塑料袋内于自来水水流下快速解冻。解冻后用水洗净,用滤纸吸干,分解成肌肉、肝脏、皮肤等部分。分别称量后将各组织剪碎,充分均质。5.1.2新鲜河豚鱼样品将样品用水洗净后用滤纸吸干,分解成肌肉、肝脏、皮肤等部分,分别称量后将各组织剪碎,充分均质。5.2试样提取5.2.1肌肉组织试样准确称取试样10g(精确至0.1g)于50mL离心管中,加入乙酸溶液(0.5%)11mL,充分混匀,沸水浴中煮沸10min,不断搅拌以防止组
6、织结块。冷却至室温,20000g高速离心20min,移取上清液于25mL容量瓶中。向沉淀中加入乙酸溶液(0.5%)11mL,充分混匀,沸水浴中煮沸5min,不断搅拌以防止组织结块。冷却至室温,20000g高速离心20min,移取上清液。合并上清液,混匀,用乙酸溶液(0.5%)定容至25mL。此提取液1mL相当于0.4g试样。5.2.2肝脏组织试样准确称取10g(精确至0.1g)试样于50mL离心管中,加入乙酸溶液(0.5%)8mL,充分混匀,室温下20000g高速离心20min,移取上清液于25mL容量瓶中。用8mL乙酸
7、溶液(0.5%)重复提取1次。合并上清液,混匀,用乙酸溶液(0.5%)定容至25mL。此提取液1mL相当于0.4g试样。5.2.3皮肤组织试样准确称取10g(精确至0.1g)试样于50mL离心管中,加入乙酸溶液(0.5%)11mL,充分混匀,室温下20000g高速离心20min,移取上清液于25mL容量瓶中。用11mL乙酸溶液(0.5%)重复提取1次。合并上清液,用乙酸溶液(0.5%)定容至25mL。此提取液1mL相当于0.4g试样。注1:试样制备时,冷冻样品需在半解冻状态下进行操作。试样若不能及时检验,应于4℃保存,在
8、24h内检验。注2:如果河豚鱼样品的脏器或者组织不足10g的情况下,按照以上方法进行提取操作,需适量减少乙酸溶液(0.5%)的加入量。注3:提取液中应不含有离心分离液表面上被分离出来的油状物、胶状物或者脂质类。5.3小鼠试验选取19.0g~21.0g的无特定病原体级(SPF)昆明系雄性健康小鼠6只,称量并记录体重。随
