水产品中河豚毒素的测定 标准文本.doc

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1、GBxxxx—xxxx食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定（征求意见稿）xxxx-xx-xx实施xxxx-xx-xx发布中华人民共和国卫生部发布2010-06-01实施2010-××-××发布GBxxxx—xxxx前言本标准代替GB/T23217-2008《水产品中河豚毒素的测定液相色谱-荧光检测法》、GB/T5009.206—2007《鲜河豚鱼中河豚毒素的测定》和SN/T1569.2-2013《出口河豚鱼中河豚毒素检测方法第2部分：小鼠生物法》。整合后的标准与以上标准相比，主要变化如下：——标准名称修改为“食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定”；——将液相色谱-串联质谱法确定为第一法，液

2、相色谱-荧光检测法确定为第二法，酶联免疫吸附法确定为第三法，小鼠生物法确定为第四法；——增加了免疫亲和柱进行河豚毒素提取净化的步骤；——修改了河豚毒素标准系列的配制方法，以溶剂型标准溶液外标法定量替代基质标准溶液外标法定量；——修改了色谱分离方式，以梯度洗脱替代等度洗脱；——修改了免疫学检测方法，以河豚毒素间接竞争酶联免疫吸附法替代河豚毒素直接竞争酶联免疫吸附法；——删除了C18固相萃取柱进行河豚毒素提取液净化的步骤。IGBxxxx—xxxx食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定1范围本标准规定了水产品中河豚毒素的测定方法。本标准第一法适用于鲜河豚鱼的肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素（te

3、trodotoxin，简写为TTX）的测定。第二法适用于河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤及鱿鱼中河豚毒素的测定。第三法适用于鲜河豚鱼中TTX的测定。第四法适用于河豚鱼中肌肉、肝脏、皮肤中河豚毒素的测定。第一法液相色谱-串联质谱法2原理试样经1%乙酸甲醇提取，免疫亲和柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1甲醇（CH3OH）色谱纯。3.2乙腈（CH3CN）色谱纯。3.3甲酸（HCOOH）色谱纯。3.4乙酸（CH3COOH）优级纯。3.5乙酸铵（CH3COONH4）色谱纯。3.6磷酸氢二钠（Na2HPO

4、4·12H2O）。3.7磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。3.8氯化钠（NaCl）。3.9氢氧化钠（NaOH）。3.101%乙酸-甲醇溶液：量取10mL乙酸（3.4），用甲醇定容至1000mL。3.112%乙酸-甲醇溶液：量取10mL乙酸（3.4），用甲醇定容至500mL。3.120.1%甲酸溶液：量取0.1mL甲酸（3.3），用水稀释并定容至100mL。3.130.1%甲酸溶液（含5mmol/L乙酸铵）：取0.5mL甲酸（3.3）和0.19g乙酸铵（3.5），用水溶解并定容至500mL。3.140.1%甲酸-乙腈溶液（1：1，体积比）：取50mL0.1%甲酸溶液（3.12）加到50mL

5、乙腈中，混合均匀。3.15磷酸盐缓冲溶液（PBS溶液，0.05mol/L）：称取磷酸氢二钠6.45g（3.6），磷酸二氢钠1.09g（3.7），氯化钠4.25g（3.8），用超纯水溶解并定容至500mL。20GBxxxx—xxxx3.16氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称取20g氢氧化钠（3.9），用水溶解并定容至500mL。3.17河豚毒素标准品（tetrodotoxin，分子式C11H17N3O8）：纯度≥98%。3.18标准溶液配制3.18.1河豚毒素储备液（100μg/mL）：准确称取河豚毒素10.0mg（3.17），用少量0.1%甲酸溶液（3.12）溶解后以甲醇（3.1）定容至10

6、0mL，-18℃以下避光保存。3.18.2河豚毒素中间液：准确量取河豚毒素标准储备液（3.18.1）适量，以0.1%甲酸乙腈溶液（3.14）稀释成1μg/mL的标准中间液，-18℃以下避光保存。3.18.3标准曲线工作液：准确量取河豚毒素标准中间液适量（3.18.2），以0.1%甲酸乙腈溶液（3.14）稀释得到1~1000μg/L的标准系列工作液，现用现配。3.19免疫亲和柱：含河豚毒素特异性抗体的免疫亲和柱，3mL。2~8℃储存，使用前需回至室温。3.200.2μm微孔有机相滤膜。4仪器和设备4.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源。4.2分析天平：感量为0.1mg和0.01g。4.

7、3均质机：转速≥10000转/分钟。4.4涡旋振荡器。4.5高速冷冻离心机：转速≥8000转/分钟。4.6超声波清洗器。4.7固相萃取装置。4.8氮吹仪。4.9pH计。5分析步骤5.1试样制备用蒸馏水清洗鱼体表面的污物，滤纸吸干鱼体表面的水分后用剪刀将鱼体分解成肌肉、肝脏、皮肤和性腺（精巢或卵巢）等部分，各部分组织分别用蒸馏水洗去血污，滤纸吸干表面的水分后将各组织剪碎，充分均质（4.3），装入清洁