水产品中西加毒素的测定 标准文本.doc

《水产品中西加毒素的测定 标准文本.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、GBxxxx—201x食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定(征求意见稿)201x-xx-xx实施201x-xx-xx发布中华人民共和国卫生部发布1.1.1.1　2010-06-01实施2010-××-××发布GBxxxx—201x食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定1　范围本标准规定了水产品中西加毒素的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于水产品中西加毒素（太平洋西加毒素：P-CTX-1，P-CTX-2，P-CTX-3）含量的测定。2　原理试样中的西加毒素经甲醇提取，C18固相萃取柱净化，液相色谱

2、-质谱/质谱仪测定，外标法定量。3　试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1　甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.2　甲酸（CH3CN）：色谱纯。3.3　乙酸铵（CH3COONH3）：色谱纯。3.4　10mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.077g乙酸铵于100mL容量瓶中，用水定容至刻度线。3.5　甲醇-10mmol/L乙酸铵溶液（95+5，v/v）：准确称取0.077g乙酸铵于100mL容量瓶中，加入50mL水溶液，再用甲醇定容至刻度线。3.6　西加毒素（P-C

3、TX-1，P-CTX-2，P-CTX-3）标准品，纯度≥90%。3.7　标准储备溶液：1mg/L。准确称取适量的西加毒素（P-CTX-1，P-CTX-2，P-CTX-3）标准物质，用甲醇配制成浓度为1mg/L的标准储备溶液，-18℃以下避光可保存6个月。3.8　标准中间溶液：0.01mg/L。吸取适量标准储备溶液（4.7），用甲醇稀释成0.01mg/L的混合标准工作溶液，-18℃以下避光可保存3个月。3.9　基体匹配标准工作溶液：吸取适量的标准中间溶液（4.8），用空白样品提取液配成浓度为0.0μg/L、

4、0.1μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L的基质匹配标准工作溶液。现配现用。3.10　C18固相萃取柱：200mg，3mL。使用前依次用6mL甲醇和6mL水活化，保持柱体湿润。3.11　滤膜：0.22µm,有机相型。4　仪器和设备2GBxxxx—201x1.1　液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。1.2　氮吹仪。1.3　粉碎机。1.4　离心机，转速≥5000rpm。1.5　均质机，参考转速：3400-24000rpm。1.6　分析天平：感量0.1mg和0.01g。2　样

5、品制备水产品取其可食部分（去骨），切成小块，用粉碎机制成肉糜。于-18°C以下冷冻存放。3　分析步骤3.1　样品前处理6.1.2.26.1.1提取称取5g（精确至0.01g）试样，经冻干后充分碾碎于50mL具塞离心管中，加入10mL甲醇与5mL正己烷，均质提取1min，涡旋混匀后超声波振荡提取15min，于5000r/min离心3min，弃去上层正己烷，将甲醇转移至试管中。残渣再用10mL甲醇重复提取一次，合并提取液，45℃下用氮气吹至5mL左右，加入5mL水，混匀后待净化。6.1.2净化将上述提取液转入

6、处理过的C18固相萃取柱中，以约1滴/s的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用6mL甲醇-水（1+1，v/v）淋洗并抽干固相萃取柱。用4mL甲醇洗脱，收集全部流出液于20mL离心管中，40℃下用氮气吹干。残渣用甲醇-乙酸铵溶液（3.5）定容至1.0mL，旋涡溶解后，过微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。6.2测定6.2.1液相色谱参考条件a)色谱柱：C18色谱柱，50mm×2.1mm（内径），2.5µm，或相当者；b)柱温：30℃；c)进样量：20µL；d)流动相、流速及梯度洗脱条件参见表1。表1流动相

7、梯度洗脱程序时间min流速mL/min10mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)%95%甲醇+10mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)%00.2550501.00.2550501.10.2520802.00.2520802.10.2501004.00.2501002GBxxxx—201x4.10.2550508.00.2550506.2.2质谱参考条件a）离子化模式：电喷雾离子源；b）扫描方式：正离子扫描；c）监测方式：多反应监测（MRM）；d）分辨率：单位分辨率；e）其它参考质谱条件参见附录A。6.2

8、.3定性测定按照上述条件测定试样和标准工作溶液，试样的质量色谱峰保留时间应与标准物质一致，允许偏差小于±2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，定性离子参考附录A表A.1，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度%＞50＞20～50＞10～20≤10允许的最大偏差%±20±25±30±506.2.4定量测定在仪器最佳