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《gb 5009.273-2016 食品安全国家标准 水产品中微囊藻毒素的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB5009.273—2016食品安全国家标准水产品中微囊藻毒素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB5009.273—2016前言本标准代替SN/T2678—2010《进出口淡水产品中微囊藻毒素的检测方法酶联免疫吸附法》。本标准与SN/T2678—2010相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准水产品中微囊藻毒素的测定”;———增加了液相色谱-串联质谱法。ⅠGB5009.273—2016食品安全国家标准水产品中微囊藻毒素的测定1
2、范围本标准规定了水产品中微囊藻毒素(环状七肽)的液相色谱-串联质谱和间接竞争酶联免疫吸附的测定方法。本标准适用于鱼、虾、河蚌等水产品中微囊藻毒素的测定。第一法液相色谱-串联质谱法2原理试样中的微囊藻毒素(MC-LR,MC-RR和MC-YR)经甲醇溶液提取,固相萃取小柱净化,液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇(CH4O):色谱纯。3.1.2甲酸(CH2O2):色谱纯。3.1.3甲酸铵(CH5O2N):色谱纯。3.1.4乙腈(C2H3N):色谱纯。
3、3.1.5氮气:纯度≥99.99%。3.2试剂配制3.2.1甲醇溶液(20%):将20mL甲醇与80mL水混合均匀。3.2.2甲醇溶液(80%):将80mL甲醇与20mL水混合均匀。3.2.3淋洗溶液:10mL水;10mL甲醇溶液(20%)。3.2.4含0.1%甲酸的甲醇溶液:用甲醇将0.1mL甲酸定容至100mL。3.3标准品微囊藻毒素标准品:微囊藻毒素-LR(MC-LR,C49H74N10O12,CAS号101043-37-2)、微囊藻毒素-YR(MC-YR,C52H72N10O13,CAS号101064-48-6)、微囊藻毒素-RR(MC-RR,C
4、49H75N13O12,CAS号111755-37-4),纯度均≥95%。3.4标准溶液配制3.4.1微囊藻毒素标准储备液(10μg/mL):分别称取微囊藻毒素标准品MC-LR、MC-YR、MC-RR各1GB5009.273—20160.5mg(按实际含量折算,精确至0.01mg),用500μL甲醇溶解,再用水定容至50mL。标准储备液贮存于密闭棕色玻璃瓶中,于-20℃储存,有效期为3个月。3.4.2标准中间液(10ng/mL):吸取微囊藻毒素标准储备液(10μg/mL)10μL于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。标准中间液于-20℃冷冻避光保存,有效
5、期为3个月。3.4.3基质匹配的混合标准系列工作液:用空白基质溶液将微囊藻毒素标准中间溶液(10ng/mL)稀释成含量为0.1μg/L、0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L和5.0μg/L的混合标准系列工作液。现用现配。3.5材料3.5.1固相萃取小柱:ODSC18柱,500mg/6mL,或性能相当者。3.5.2有机相微孔滤膜:0.22μm。3.5.3玻璃纤维滤纸:GF/F规格,或性能相当者。4仪器和设备4.1液相色谱-质谱仪:配有电喷雾离子源。4.2分析天平:感量为0.001g和0.00001g。4.3离心机:转速大于8000
6、r/min。4.4均质器。4.5旋转蒸发仪。4.6涡旋振荡器。5分析步骤5.1试样制备取样品的可食部分约500g,充分均质或粉碎,装入洁净容器中,密封,并标明标记。试样置于-18℃以下避光保存,一个月内须完成检测。5.2提取准确称取5g(精确至0.01g)试样,置于50mL离心管中,加入10mL甲醇溶液(80%),充分振荡均匀,8000r/min离心10min,取上清液于新离心管中。残渣重复提取一次,合并两次提取液,提取液定容至30mL,以玻璃纤维滤纸过滤。取6mL滤液加入30mL水稀释。待净化。5.3净化C18固相萃取小柱使用前依次用10mL甲醇和10
7、mL水活化,流速控制在1滴/s~2滴/s。将提取液全部过柱后,用10mL甲醇溶液(20%)淋洗,以10mL含有0.1%甲酸的甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,以氮气浓缩至近干。加入1mL甲醇溶液(20%)充分溶解残渣,用有机相微孔滤膜过滤,待上机检测。5.4空白对照试验分别称取与待测样品基质相同、不含所测微囊藻毒素的空白试样10份于50mL离心管中。以下操作按5.2和5.3的操作处理。合并10份空白试样溶液,用微孔滤膜过滤。滤液可作为空白基质溶液配制基质匹配的混合标准系列工作液。2GB5009.273—20165.5仪器参考条件5.5.1液相色谱参考条件a)色谱
8、柱:C18色谱柱,柱长250mm,内径2mm,粒径5μm,或同等性能色谱柱;b)
