乙型肝炎病毒ymdd

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1、乙肝病毒YMDD变异的检测乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)P区最长，约占基因组75%以上，编码病毒体DNA多聚酶。HBVDNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P及XHBV属于嗜肝DNA病毒科。其基因组大小仅约3200bp，是已知真核细胞病毒中最小的DNA病毒。乙型肝炎流行病学HBsAgEpidemicity8%andabove=High2%-8%=IntermediateBelow2%=Low何为YMDD变异HBVP区编码的DNA聚合酶基因在739或741位点发生突变，其编码的HBV逆转录酶活性部位——“酪氨酸（Y）－蛋氨酸（M）－天门冬氨酸（D）－天门冬氨酸（D

2、）”(YMDD主型区)，变为“酪氨酸（Y）－缬氨酸（V）－天门冬氨酸（D）－天门冬氨酸（D）”（YVDD）或“酪氨酸（Y）－异亮氨酸（I）－天门冬氨酸（D）－天门冬氨酸（D）”（YVDD）导致逆转录酶亚结构发生改变，妨碍了与拉米夫定的结合，从而造成HBV对拉米夫定敏感性下降。YMDD突变Met-----ATGYMDDVal------GTGYVDDIle-------ATTATCYIDDATALamivudineandwild-typeHBVHBVpolymeraseNucleotides(wild-type)highaffinityLamivudineinhibitionss(-)DN

3、AYMDDLamivudineandYMDDvariantHBVNucleotidesss(-)DNAHBVpolymerase(variant)YV/IDDreducedaffinityLamivudineweakinhibitionYMDD变异的发生病毒病毒多聚酶缺乏矫正功能Lamifudin作为选择因素对耐药突变株的选择病毒高复制高变异率Lamifudine停药后YMDD野生株恢复拉米夫定治疗HBV感染治疗过程与YMDD变异关系治疗过程研究例数（例）无变异（YMDD）变异治疗前139106（76%）33（24%）9个月3733（89%）4（11%）12个月3725（67.5%）1

4、2（32.4%）18个月167（43.7%）9（56.3%）24个月124（33.3%）8（66.7%）引自JVirol.Metods1999；83：181-187对拉米夫定耐药株的防治针对病毒阿地福韦拉米夫定+阿地福韦拉米夫定+干扰素(或IFN续贯治疗)针对宿主细胞因子HBVDNA疫苗诱导持续病毒抑制恢复特异性抗HBVCD4/CD8免疫应答1GishRG,AntimicrobAgentsChemother,2002;46:1734-17402SantantonioT,JHepatol,2002;36:799-804Lamifudine抗HBV治疗过程中需注意的病毒变异问题Lami

5、fudine对HBVYMDD野生型的抗病毒作用优于Adefovir，而且对机体潜在副作用也小于Adefovir，所以针对携带HBVYMDD野生型患者，首选择Lamifudine。在Lamifudine治疗过程中动态监测YMDD变异情况，一旦出现YMDD变异，改用Adefovir，这样可以持续抑制病毒变异株，第一时间就使病毒变异株就处在抑制状态。在使用Adefovir药物治疗过程，也动态检测YMDD变异情况，防止YMDD野生株回复成优势株，一旦出现YMDD野生株成为优势株，改用Lamifudine或者联合Lamifudine和Adefovir抗HBV治疗是可取的。通过对YMDD变异的动态监

6、测，有助于合理选择药物，长期使HBV处于低水平复制状态，甚至耗竭HBVcccDNA库，达到彻底消除HBV的目的。病毒耐药性的诊断表型耐药－在治疗期间血清病毒DNA水平上升基因型耐药－病毒多聚酶基因出现突变1NafaS,Hepatology,2000;32:1078-10882StuyverL,JclinMicrobiol,2000;38;702-707YMDD突变检测常见方法基因测序法ELISA法生物芯片荧光定量PCR方法基因测序法这是一种比较经典的方法，突变检测的准确性为100％，但测序周期较长，仪器昂贵，不适于临床大面积推广ELISA法和PCR-RFLP法操作繁琐，费时，不适合当天出

7、检测报告在进行PCR扩增后进行开放性实验，容易造成标本的交叉污染，影响实验室的质量控制生物芯片需要配置芯片仪，一次性投入资金较大，且芯片成本较高，不适于在临床大面积推广需要开放式杂交，会造成一定的交叉污染，影响结果Taqman荧光定量PCR原理特异性荧光双标记探针Taq酶5’→3’外切酶活性延伸结束检测荧光变性退火试剂原理野生型变异型Thankyou!