RP-HPLC测定氢溴酸右美沙芬颗粒中的有关物质.doc

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1、RP-HPLC测定氢溴酸右美沙芬颗粒中的有关物质【摘要】目的建立RP-HPLC测定氢溴酸右美沙芬颗粒的有关物质。方法采用Shim-packVP-ODSC18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸和三乙胺各5ml加水至1000ml，混匀）（35∶65）为流动相；流速为0.8ml/min，检测波长为278nm。结果氢溴酸右美沙芬与杂质能够有效分离；最低检测限为9ng。结论本法简便、快捷、准确，适用于氢溴酸右美沙芬颗粒的有关物质测定。【关键词】氢溴酸右美沙芬颗粒；RP-HPLC；药物监测氢溴酸右美沙芬(DH)为非麻醉性药物，是中

2、枢性镇咳药，可用于以干咳或痉挛性咳嗽为主要症状的急性上呼吸道感染，急性或慢性支气管炎等呼吸系统疾病［1,2］。原质量标准［3］尚未制定检查有关物质的内容。本研究采用自身对照法测定氢溴酸右美沙芬的有关物质，方法简单、可行。且方法中的色谱条件能达到较好分离主成分及其降解产物，可用于考察氢溴酸右美沙芬颗粒生产、贮藏过程中的杂质变化情况。　　1仪器与试药　　1.1仪器　　SHIMADZULC-20A高效液相色谱仪(配备LC-Solution工作站)，Shim-packVP-ODSC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）。　　1.2试药　　氢溴酸右美沙芬对

3、照品(中国药品生物检定所，批号100201-199901，含量95.0%)，氢溴酸右美沙芬颗粒(广东和平制药厂提供，批号050613，规格：7.5mg)。　　1.3试剂　　乙腈为色谱纯，磷酸、三乙胺等均为分析纯。　　2方法与结果［3,4］　　2.1色谱条件与系统适用性试验　　Shim-packVP-ODSC18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，以乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸和三乙胺各5ml加水至1000ml，混匀）（35∶465）为流动相，流速为0.8ml/min，检测波长为278nm。理论塔板数按氢溴酸右美沙芬计算应不低于1500，氢溴酸右美沙

4、芬峰与相邻主杂质峰的分离度应不小于1.5。　　2.2测定方法　　精密称取本品细粉（相当于氢溴酸右美沙芬25mg），置50ml量瓶中，加水适量振摇使溶解，加水至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照溶液；量取对照液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成分色谱峰高约为满量程的25%，再量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。如有杂质峰，与对照溶液主峰面积比较，各杂质峰面积（除溶剂峰外）之和

5、不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%）。　　2.3样品的破坏试验　　2.3.1酸破坏　　取本品适量，加1mol/L盐酸溶液15ml振摇使溶解，于90℃水浴3h，放冷，用1mol/L氢氧化钠溶液调节至中性，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=3.9，分离良好。见图1。　　2.3.2碱破坏　　取本品适量，加1mol/L氢氧化钠溶液15ml振摇使溶解，于90℃水浴3h，放冷，用1mol/L盐酸溶液调节至中性，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的

6、溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=12.6，分离良好。见图2。　　2.3.3氧化破坏　　取本品适量，加30%的过氧化氢溶液20ml使溶解，于90℃水浴3h，放冷，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=18.8，分离良好。见图3。　　2.3.4高温破坏　　取本品适量于115℃恒温烘箱中烘3h，放冷，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行

7、测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=3.0，分离良好。见图4。　　2.4空白辅料干扰性试验　　精密称取处方量空白颗粒（不含主药）适量，加水振摇并稀释，按“2.2”项下配制供试液，滤过，取续滤液20μ4l注入液相色谱仪。结果分离度均大于2，表明本品空白辅料对有关物质检查无干扰。　　2.5定量限和最低检出限的测定　　配制不同浓度的氢溴酸右美沙芬对照品溶液，按“2.2”项下进样测定，以S/N≥10作为定量限，以S/N≥3作为最低检出限，测得氢溴酸右美沙芬的定量限为0.78μg，最低检出限为9ng。　　2.6重复性试验　　精密称取同一批样品6份，分别加水，

8、振摇使溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，按“2.2”项下的方法测定，结果主峰面积R