隐球菌脑膜炎的实验室检测

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1、隐球菌脑膜炎的实验室检测首都医科大学附属北京地坛医院王慧珠 一、新型隐球菌的特点新型隐球菌广泛分布于自然界中，鸽子粪是主要传染源。圆形、卵圆形，菌体为宽厚的荚膜包裹；不形成菌丝和孢子；出芽生殖。分A、B、C、D四个血清型。A型最多见。致病菌属包括17个种和8个变种，主要是新型隐球菌新生变种和格特变种，已报道引起人类疾病的还有浅黄隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌，但是很少见。二、致病性新型隐球菌为条件致病菌，免疫功能低下者为高发人群，但也可发生在免疫功能正常人。白血病、恶性肿瘤、艾滋病、SLE、尿毒症患者。长期广谱抗生素、激素、免疫抑制剂使用者更易感染。隐球菌侵入肺部后，局部病变进展缓慢，病变

2、轻微，常无临床症状，但有20%以上的病例可由此经血进入中枢神经系统，导致隐球菌性脑膜炎的发生。三、临床表现（一）起病缓慢、可呈亚急性，潜伏期2-4周。（二）脑膜炎的表现：意识障碍，头痛、发热（以不规则热多见）。（三）颅内压的表现，可有颅神经损害。（四）未经治疗病情逐渐恶化（五）血常规正常（六）腰穿：压力增高明显，脑脊液外观透明或微混，白细胞轻中度增多（40-400/ul)，以淋巴细胞为主。蛋白轻度升高，糖减低，氯化物轻中度减低。四、其他部位隐球菌病（一）肺隐球菌病（二）皮肤隐球菌病（三）骨隐球菌病五、新型隐球菌对CNS（中枢神经系统）具有亲和力？机理可能和脑脊液中有隐球菌所需要的天门冬酰胺

3、、肌酸内酰胺等刺激真菌生长的营养因子有关。六、特殊宿主的隐球菌病隐球菌病是AIDS病人最重要的也是致命的真菌感染并发症，在AIDS人群中，发病率可达6%～10%，而在中部非洲地区可高达15%～30%，这可能与发达国家对于AIDS合并机会感染控制水平有关，即早发现、早治疗。AIDS病人患隐球菌病的临床表现与其他免疫受损的病人相似，然而，感染部位常含有更多的菌体，80%以上的病人在做出诊断时已有脑膜炎或脑膜脑炎，且病变更广泛。AIDS患者并发隐球菌病很少能治愈，常见持续感染和复发，有文献报道10%~25%的病人死于治疗期间。七、北京地坛医院情况我院2009年1月至2011年12月共确诊405例

4、AIDS患者，其中隐球菌脑炎患者为53例，感染率13.1%。其中墨汁染色阳性25例（47.2%），真菌培养阳性23例（43.4%），抗原检测阳性53例（100%）。通过单一或联合治疗，治愈1例（1.9%），好转40例（75.5%），未愈6例（11.3%），死亡6例（11.3%）。八、诊断对于临床上出现CNS感染的症状、体征、脑脊液压力明显增高及糖含量明显下降的患者，应高度警惕隐球菌脑膜炎的可能，尤其对具有免疫功能底下者、有养鸽或有鸽粪接触史者，更应高度怀疑。实验室检查具有重要的诊断价值，包含涂片镜检、培养、隐球菌特异性抗原检测和组织病理检查发现隐球菌。九、治疗隐球菌病的治疗包括真菌药物治疗

5、、对症治疗、免疫制剂治疗、手术治疗及原发病的治疗等。抗真菌治疗：两性霉素B(0.5-0.8mg/kg/d)，由1mg/d起渐加量，加入500ml葡萄糖液中避光静脉缓慢滴6h以上；或0.5-1mg脑室引流管缓慢抽吸。氟胞嘧啶（25mg/kg，q6h)。氟康唑（200-400mg/d)/伊曲康唑（100mgbid)。十、治愈标准连续3次CSF涂片镜检阴性或抗原阴性十一、实验室检查（一）CSF的涂片革兰氏染色：将临床送检的CSF标本1500g离心5分钟，将沉淀物进行涂片、墨汁染色及真菌培养，用上清夜做新型隐球菌抗原的检测。一定要离心，容器要选择能离心的无菌塑料试管，避免二次污染。ppt14的图片

6、显示的是隐球菌革兰氏染色镜下形态，可见黑色的孢子，以及夹膜抗原。（二）CSF的墨汁染色1.方法（1）用离心后的沉淀物进行墨汁染色。（2）墨汁与脑脊液比例一定要合适，一般选1：2的比例。（3）选用优质墨汁。重视墨汁染色，墨汁染色阳性可以直接向临床报告检测到新型隐球菌。2.CSF的墨汁染色隐球菌的形态取可疑标本置玻片上，加1滴墨汁混匀后加盖片镜检。墨汁染色检测隐球菌对于早期诊断隐球菌性脑炎十分重要，但墨汁染色检测隐球菌镜下形态要注意与单核细胞的区别，隐球菌本身并不被染上墨汁，但在黑色背景下为5-20μm，圆或卵圆形，有宽阔透明的荚膜，菌体周边显现为强的折光形成一个折光环，中心部分为折光性较强的

7、颗粒状或条状物质，也能见到单芽孢子，出芽孢子的颈粗细不一，当母子细胞尚未完全分离时同样可见荚膜沟通，无假菌丝。ppt17的图片显示的是墨汁染色高倍镜下隐球菌的形态，可见外圈为透明的荚膜，中间是核，实际工作中，在显微镜下会看到核仁。ppt18的图片显示的是将ppt17图片中隐球菌的形态放大后的效果，可以看得更清晰，外圈是宽厚的荚膜，中间是核。ppt19的图片显示的是墨汁染色隐球菌和母孢子没有完全分离时的形态。ppt20的图