支原体检测方法的建立及在疫苗检验中的应用

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1、支原体检测方法的建立及在疫苗检验中的应用支原体检测方法的建立及在痘苗检验中的应用姚晓辉,练炳洲,王林川,邓月嫦,王凤国,李小静(广东大华农动物保健品股份有限公司,广东新兴527400)摘要:建立两种支原体检测方法,直接培养法和PCR方法.两种方法互为补充,共同应用于生产检验,为生产提供及时可靠数据的同时对产品严格把关,提高产品质量,对树立公司品牌形象具有重要意义.关键词:支原体;检测方法;疫苗检验;应用EstablishmentofDetectionMethodofMycoplasmaandApplication●l—T●.一''intheVa

2、cclneDocimasiaYaoXiaohuiILianBingzhoulWangLinchuanlDengYuechangIWangFengguofLiXiaojing(GuangdongDahuanongAnimalHealthProductsCO.,LTD.GuangdongXinxing527400)Abstraet:Thestudiesestablishedtwodetectionmethods一一directcultureandPCR.Thetwomethodscom—plementedeachotherandappliedint

3、hevaccinedocimasia.Thedetectedresultscouldprovidetimelyanddependabledatafortheproduction,andcouldcheckontheproductsstrictly.Thesecouldimprovethequalityofproducts.Thereisanimportantmeaningforestablishingthecompany'Sbrandimage.Keywords:Mycoplasma;detectionmethod;vaccinedocimas

4、ia;application支原体个体微小,结构简单,无细胞壁,呈多形性,可通过细菌滤器I1l,因此工作环境,操作者本身,培养基,污染支原体的细胞,试验器材和用来制备细胞的原始组织或器官都可能给生产带来支原体的污染嘲.生产生物制品的细胞或鸡胚一旦受到污染,可影响病毒的繁殖,导致生物制品的品质下降或废弃,造成生产成本上升且降低了经济效益,威胁用药(免疫)对象的安全,影响公司的品牌形象.因此建立支原体的检测方法非常重要.作者简介:姚晓辉,女,(1983～),山东,硕士研究生.从事疫苗产品质量检测.目前,支原体检测方法主要有分离培养法,DNA荧光染色

5、法,电镜法,血清学方法以及核酸探针法,但都存在着种种不足f3】.由于支原体菌体较小,营养要求较高,生长缓慢以及支原体种间存在交叉抗原等生物学特性,限制了分离培养法和血清学方法在支原体检测中的应用.PCR技术是一种模拟体内DNA复制的体外扩增方法,比培养法快速,敏感,方便.对某些难以用培养法和血清学方法检测的支原体,PCR技术显示了其优越性.国家标准规定对兽用生物制品中支原体的检测采用直接培养法,因此我公司建立了培养法用于血清,种毒和成品的支原体检测.该方法是目前最2010年12月ChinaAnirnalHealth中国动物保健23I直接的检测方

6、法,通过观察液体培养基的颜色变化和显微镜下观察支原体菌落形态就可判断结果;培养基成分丰富,生物制品中常污染的支原体都可以培养出,是目前较敏感的检测方法.缺点是培养时间长,需3周～5周才能判断结果.针对培养法耗时的特点,我公司建立了PCR检测方法,用于原辅材料(牛奶,蔗糖,血清,细胞,细胞培养基)和半成品的支原体检验.该方法的应用,可以实现从源头进行把关,确保不合格原辅材料和半成品不流入下一道工序,在保证产品质量的同时,达到节约生产成本,提高经济效益的目的,同时在一定程度上对原辅材料的采购具有指导意义;该检测方法快速,从核酸抽提到PCR检测,全程

7、只需3小时～4小时,对比培养法需29天才能出结果,PCR检测方法大大缩短了检测时间,有利于车间合理高效的安排生产,提高了劳动效率;该检测方法特异性强,敏感性高,能特异性扩增多种支原体的保守基因片段,一次检测就可覆盖多种支原体,同时设立阳性和内控对照,保证检测结果的准确性,通过大量的试验摸索,保证了该方法高度的敏感性,即使极少量的支原体污染也可检测出.培养法和PCR法两种检测方法互为补充,培养法弥补了PCR方法覆盖品种不全和失活的支原体也能检测出的缺点,PCR方法弥补了培养法操作复杂和检测时间长的缺点,两种方法共同应用于生产,为生产提供可靠的数据

8、支持.以下简要介绍下两种检测方法.一.培养法1.试验材料支原体培养基(购自北京海淀中海动物保健科技公司),小培养皿,小试管(购自广州市云荟贸易有限公司