重组人硫氧还蛋白及其活性检测的论文

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1、重组人硫氧还蛋白及其活性检测的论文重组人硫氧还蛋白及其活性检测的论文【摘要】目的：采用基因克隆技术及原核表达技术重组人硫氧还蛋白（trx），并证实重组trx具有二硫键还原酶活性。方法：从人睾丸互补dna（cdna）文库克隆出人的trxcdna，采用限制性酶切方法构建pqe-32/trx原核表达质粒，并在大肠杆菌m15中进行稳定表达，应用talon金属螯合树脂纯化重组人trx蛋白。用western印迹方法鉴定重组人trx，并检测trx的二硫键还原酶活性。结果：（1）克隆的人trxcdna序列与基因库（genebank）（x54539）

2、序列比较，可译框架完全相同；（2）原核表达载体中含有trxcdna的全长序列；（3）经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（iptg）诱导，含质粒pqe-32/trx的大肠杆菌成功表达出人的trx；（4）活性检测证实重组trx具有二硫键还原酶活性。结论：成功构建原核表达载体pqe-32/trx，并重组出有活性的人trx蛋白，可以用于保护性研究。【关键词】基因；硫氧还蛋白；dna，重组rebinationofhumanthioredoxinproteinanddetectionoftrxactivityzhangyinawuxiaowei

3、zouningthesecondaffiliatedhospital,harbinmedicaluniversity,harbin,heilongjiang,150086,chinaabstract：objective:tousethetechnologyofgeneticcloningandprokaryoticexpressiontorebinatehumanthioredoxin(trx)proteinandverifythatrebinantproteinhastheactivityofdisulfidereductase.

4、methods:trxcdnasequencewasclonedfromhumantesticlecdnalibraryandconstructedpqe-32/trxprokaryoticexpressingplasmidbythemethodofrestrictionenzymeanalysis.theplasmidstablyexpressedtherebinantproteinineco.li(escherichiacoli)m15.theproteinswerepurifiedbytalonmetalaffinityres

5、insandidentifiedbywesternblot.theactivityofdisulfidereductasewasdetected.results:(1)paringthesequenceintheclonedhumantrxcdnasequenceswithgenbank(x54539),theopenreadingframewasallsame;(2)thepqe-32/trxprokaryoticexpressingvectorhadthefulllengthsequenceoftrxcdna;(3)eco.li

6、havingplasmidpqe-32/trxhadsuccessfullyexpressedhumantrxproteinthroughinducionofiptg;(4)throughtheassayofactivity，therebinanttrxproteinwasprovedthathaveactivityofdisulfidereductase.conclusion:thisstudysuccessfullyconstructpqe-32/trxprokaryoticexpressingvector,andsuccess

7、fullyrebinethehumanproteintrxthathavetheactivityofdisulfidereductase.rebinanttrxproteincanbeusedtoprotectivestudies.keywords：genes;thioredoxin;dna,rebinant硫氧还蛋白（thioredoxin，trx）作为机体内一种重要的氧化还原调节蛋白，具有多种生物学功能[1～3]。WWw..cOmtrx是非常有效的自由基清除剂，能保护细胞免受诸如肿瘤坏死因子(tnf)以及h2o2等引起的氧化损伤

8、。此外，trx还通过修复受损伤的蛋白、抑制凋亡和调节某些转录因子表达对细胞起保护作用。目前研究证实trx在组织的缺血再灌注损伤和神经退行性病变的防治中发挥了重要作用[4～6]。本研究试图通过基因克隆技术重组出具有生物学活性的人trx蛋