重组人长效白介素7(il-7-ctp)的研制及其生物活性研究

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1、中化代码：８４５０１０１１２０１９学皆：ｂ８４５Ｖ，密级：＇－－Ｖ媒女《像化Ａ誦串〇国■■ｍ含疫重组人长效白介素７－７＿ＣＴＲ（ＩＬ）Ｓ挥Ｓ柄的研制及其生物活性研究ｇＡＩｐｉｍ控’趣議究生：李金松Ｉ制／培养单位：ｉ中国疾控中１＞病毒病所＾［］ｊ＇导师：侯云德院±〇＼Ｐ／Ｚ。｜？身＇专业：病原生物学■＇－＾ｗ２０１５年学位代码：８４５０１学号：６８４５０１１２０１９博±学位论

2、文重组人长效白介素７（ＩＬ－７－ＣＴＰ）的巧制及其生物活牲研究研究生：李金松导师；侯云德院±中国疾病预防控制中也病毒病所申请学位级别：病原生物学学位授予单位：中国疾病预防控制中也２０１５年学位论文原创性、真实性声明－－ＣＴＰ本人郑重声明：《重组人长效白介素７（化７）的研制及其生物活性研究心＇》是本人在中国疾病预防控制中病原生物学专业攻读博去学位期间，在导师指导下完成的博去学位论文。我承诺；本论文中所涉及的所有数据、试验记录从及研究结果均真实可信、，引

3、用资料已注明出处，无剖窃篡改、抄袭之行为。如本论文原创性方面出现问题，我愿负法律责任。本课题的研究成果归中国疾病预防控制中心＇所有，发表文章的单位署若为中国疾病预防控制中特此声明！＂＂文作者学位＾（签名）：研究生导师（签名）：＾—气—無－；幽２０１年三日２０１曰。年知名ｒ（片Ｉ．目录英文缩略语．１中文摘要３英文摘耍７前胃１２一部分重组人长效白介素－７忙－７ＣＨＯ细胞的２４第（）在表达１．Ｗ２４料１１基因、、２５．载体菌株和

4、细胞株１．２序列优化２５、引物合成和序列测化．２５１３试剂及试剂盒１．４常用溶液２５２．方法２８２．１序列优化２８２－ｍ－－．２ｐｃＤＮＡ５７ＣＴＰ表达系统建立３１２．３ｐＩＲＥＳ表达质粒构建３４２－ｄｈｆ－－－Ｓ－ＣＤ．４ｐＣＩｒｌＬ７ＩＲＥ２０表达系统构建３６３铺果３９３．１序列优化结果３９３．２表达载体构建及基因鉴定４４３．３未优化的序列的表达情况评价４５３．４优化序列的瞬时转染细胞间接免疫巧光检测４６３．５稳定转染细胞间

5、接化疫巧光鉴定４７３．６流式细胞仪分选高表达细胞株４７３－．７ＥＬ１ＳＡ鉴定细胞株山７表达量４８－－ｗｅｓ３．８＾７ＣＴＰ阳性细胞ｔｅｒｎｂｌｏｔ检测５０４対论５１５．小结５５第二部分ＩＬ７－ＣＴＰ蛋白纯化工艺研究５６ＩＩ１．欄５６１．１细胞系５６１．２纯化柱５７１．３常用试剂５７２．施５７２．１使用生物学软件对蛋白质特征进行分析５７２．２蛋白纯化５７２．２．１巧纯５７２２．．２常见的纯化方法５７２－．２

6、．３ＣＮＢｒＣＴＰ亲和纯化巧２－－．２．４纯化的蛋白使用ＥＬＩＳＡ测定ｍ７ＣＴＰ纯度６０３６０．结Ｈ３－－．１＾７ＣＴＰ蛋白进行生物信息学分析和预测６０３１１二．．蛋白质的级结构分６０３丄２－７－ＩＬＣＴＰ蛋白３Ｄ结构６０３丄３－７－ＣＴＰ蛋白的等电点和理论分子量６预测＾１－３丄４ｎ７－ＣＴＰ蛋白０糖基化＾位点的预测６１３丄５忙－７－ＣＴＰ蛋白Ｎ糖基化位点６１３丄６＾－７－ＣＴＰ蛋白二硫键６３３丄７－ＩＬ７ＣＴＰ蛋白的疏水和亲水性预测６３

7、３．２．硫酸按沉淀预实验和优化６３３３６５．．常用的纯化方法３３１Ａ４Ｂ．．ｃｏｎｓｅｐｈａｒｏｓｅ纯化６５－－３ｌｕｅＳｅｈａｒｏｓｅＦａ巧ｌｏｗ７ＣＴＰ．３．２Ｂｐ６Ｆ纯化Ｌ６５３－－．３．３离子交换纯化ｍ７ＣＴＰ６５－３止－ＣＴＰ．３．４疏水层析纯７６５－３４ＣＮＢＣＴＰ－ＩＬ７ＣＴＰ６７．ｒ亲和纯化３．５各种非亲和纯化方法纯化结果分析６８３．６亲和纯化结果６９４．ｉ嫌６９ＩＩＩ５．小结７１第兰部分－７－ＣＴＰ７

8、２ＩＬ活性研究１．Ｗ７３料１１７３．细胞株１．２试剂７３．１３主要仪器７３２．方化７３２－１Ｌ７ＣＴＰ蛋白的．半衰期检测７３２．２比活性测定７３２．３人外周血ＰＢＭＣ细胞分离７４２．４ＰＢＭＣ染色７４２５ＰＢＭＣ．不同浓度药物作用増殖化２．６对健康人ＰＢＭＣ、Ｔ细胞和Ｂ细