不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌中的表达

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1、不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌中的表达作者：沈才飞，白雪帆，牟丹蕾，黄长形【关键词】丙型肝炎病毒；核心蛋白；突变；原核表达ExpressionsofdifferentdeletionmutatedHCVcoreproteingenesin【Abstract】AIM:ToconstructtherecombinantplasmidsexpressingfulllengthHCVcoreproteingeneand3differentdeletionmutatedhepatitiscoreproteingenesandtoexpressthe

2、minMETHODS:EntireHCVcoreproteingeneand3differentdeletionmutatedgenefragmentsfromHCVcoreproteinwhichrespectivelycoded1-191aa,1-59aaplus81-191aa,1-169aa,1-59aaplus81-169aawereamplifiedbyPCRandclonedintoexpressionvectorpRSETA,thusformingdifferentrecombinantplasmids,whichweretransform

3、edintoBL21pLysSandinducedbyIPTG.SDSPAGEandWesternblotwereusedtotestandidentifyexpressed6×Hisfusionproteins.RESULTS:Restrictionanalysisand10/10sequencingconfirmedthatthe4recombinantplasmidsexpressingentireHCVcoreproteingeneand3differentdeletionmutatedhepatitiscoreproteingenesweresu

4、ccessfullyconstructed.BothSDSPAGEandWesternblotanalysisshowedentireHCVcoreproteingeneand3differentdeletionmutatedhepatitiscoreproteingeneswereexpressed,andtherespectivemolecularweightsoftheproductswereabout21×103,19×103,19×103and×103.Thefusionproteinproductionaccountedapproximatel

5、yfor20%oftotalbacterialprotein.CONCLUSION:DifferentdeletionmutatedHCVcoreproteingeneswereexpressedefficientlyin【Keywords】hepatitisCvirus;coreproteins;mutation;prokaryoticexpression【摘要】目的：构建丙型肝炎病毒全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中表达.方法：用PCR方法扩增基因型为1b型的HCV核心蛋白的全长及3种不同缺失突变的基因片段，对应氨基酸分

6、别为C573：1-191aa，C510:1-59aa+81-191aa，C507:1-169aa，C444:1-59aa+81-169aa.将其克隆到高效表达载体pRSETA中构成重组质粒，转化大肠杆菌BL21pLysS.10/10IPTG诱导表达6×His融合蛋白，表达产物经SDSPAGE及Westernblot检测和鉴定.结果：经酶切鉴定及测序证实全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体构建正确.经SDSPAGE及Westernblot显示在Mr约为21×103,19×103,19×103,×103处出现融合表达条带.融合蛋白的表达量约占菌体

7、蛋白总量的20％.结论：全长及3种不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因均在大肠杆菌中得到有效表达.　　【关键词】丙型肝炎病毒；核心蛋白；突变；原核表达【中图号】　　0引言丙型肝炎病毒感染已成为全球性的社会公共卫生问题，迄今尚无有效的预防性疫苗.HCV核蛋白基因相对保守［1］并且能诱导CTL反应及ADCC，有可能用于开发HCV预防及治疗性疫苗.我室曾扩增羧基末端的20个氨基酸和第60~80位氨基酸多肽基因缺失的核蛋白基因，并在真核细胞中表达成功，初步证实突变掉上诉两个肽断能提高机体免疫反应［2-3］.为进一步探讨不同缺失突变核心蛋白对免疫反应的影响，我们构

8、建了HCV核心基因不同缺失突变基因片段的原核表达载体并在大肠杆菌中