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1、基因枪转化法在棉纤维细胞中瞬时表达外源基因的研究棉化CottonScience2007.19(6):4l9～423基因枪转化法在棉纤维细胞中瞬时表达外源基因的研究于晓玲,崔百明,卫海滨,赵平娟,彭明(中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口571101)摘要:试验运用了0d,ld的棉胚珠为受体,GUS基因为报告基因,用基因枪直接对胚珠表细胞进行轰击.整个表达载体包括两个部分,第一部分是由CaMV35S调控的GUS基因,二部分是由棉纤维特异表达启动子(RDI1)调控的目标基因,因此目标基因与GUS报
2、告基能在同一个单纤维细胞中同时表达,从而提供了一个直观的在单纤维细胞中验证目标基因表达与纤维发育关系的方法.研究中对受体棉花胚珠的发育时间,基因枪的轰击压力,轰击离及轰击次数等影响转化效率的因素进行了分析优化.结果表明,最佳的转化组合条件是:开花一天的棉花胚珠为受体,当轰击压力为l100psi,轰击距离为912111,轰击次数为2次时达到最高的转化率,并能观察到稳定的GUS表达.关键词:棉纤维;基因枪;瞬时表达;GUS中图分类号:$562.035.2文献标识码:A文章编号:l002—7807(200
3、7)O6～0419一O5StudyonTransientExpressionofTargetGeneintheEpidermalCellsofCottonOvulesviaParticleBombardmentYUXiaoling,CUIBaiming,WEIHaibin,ZHAOPing—juan,PENGMi([nstituteoyTropicalBios~ienceandBiotechnolog,ChineseAcademySciences,Haikou57ll01.China)ngofTro
4、picalAgriculturalAbstract:Cottonfibersareunicellulartrichomeswhichdifferentiatefromepidermalcellsofdevelopingcottonovules.Theyhavebeenconsideredasanidealmodelforstudyingplantcellelongationandcellwallbiogenesis.Alargenumberofregulatorygenesareinvolvedin
5、theprocessoffiberdifferentiationanddevelopment.Onlyafewisknownhowtheycontrolandregulatetheentireprocessoffiberdevelopment.Becausegeneratingtransgeniccottonneedsalongperiodoftimeandtransformationefficien—cyofcottonisstilllow,itisnecessarytodevelopafasta
6、ndefficienttransientexpressionassaysystemforcharacterizatjonofcottonfiber—specificexpressiongenesandpromotersaswellastestoftheirfunction.Cottonovuleculture(0-1DPA)and8glucuronidasegene(GUS)wereusedinbiolistictransformationexperiment.Thetransientexpress
7、ionvectorcontainstwoexpressioncassettes.GUSreportergeneisdrivenbyCaMV35Spromoter,thetargetgeneisundercontrolofcottonfiber～specificpromoterRDI1.Because(5USreportergeneandtargetgenesimultaneouslyexpressinsinglefibercell,thetransientexpressionassaysystemc
8、ouldprovideaneffectivemethodtoinvestigatetherelationshipbetweentheexpressionoftargetgeneandthedevelopmentprocessoffiberintransformedsinglecottonfibercel1.Theconditionsforbombardmentwereoptimizedtoenhancethetransformation收稿日期:200609—2O作者
