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时间:2018-08-03
《全血(液体样本)microrna提取试剂盒》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外使用说明◆BLOODmisi全血(液体样本)microRNA快速提取试剂盒◆目录号1124◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外-0-BLOODmisi全血(液体样本)microRNA快速提取试剂盒目录号:1124目录编号包装单位11240150次v适用范围
2、:适用于快速提取各种全血/血浆/液体样本miRNA和其它各种小RNAv试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次Lysisbuffer4°C避光50ml70%乙醇室温9mlRNase-freeH2O第一次使用前按说明加指定量乙醇WashSolution1室温12ml第一次使用前加入28ml无水乙醇WashSolution2/3室温10ml第一次使用前加入42ml无水乙醇RNase-freeH2O室温10ml吸附柱RA和收集管室温50套microRNA吸附柱MA和收集管室温50套本试剂盒按照指示储存6个月不影响
3、使用效果。-7-储存事项:1.WashSolution1和WashSolution2/3加入无水乙醇后,可以在常温保存一个月,如果要更长时间保存,请存放在4°C,但是使用前,应该先回复到室温。2.WashSolution2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接不吸晶体,吸上清使用就可以。3.运输在常温下进行,不影响使用效果。4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。v产品介绍:近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-
4、30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血液样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解全血(液体样本)和灭活细胞RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除,最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。-7-v产品特点:1.离心吸附柱
5、内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。3.独有的裂解液配方,可直接裂解全血,不需要先裂解去除红细胞。4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。v注意事项:1.第一次使用前请先在70%乙醇、WashSolution1瓶和WashSolution2/3瓶中加入指定量乙
6、醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!2.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf5415C或者类似离心机。3.需要自备乙醇,氯仿,一次性注射器,研钵。4.Lysisbuffer和WashSolution1含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。5.预防RNase污染,应注意以下几方面:1)经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。2)使用无RNas
7、e的塑料制品和枪头避免交叉污染。3)RNA在裂解液中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。-7-1)配制溶液应使用无RNase的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)2.RNA纯度及浓度检测:完整性:RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150
8、v,15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA,电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5kb和2kb,分别相当于28S和18SrRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。纯度:OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染
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